临床ELISA测定中可能会出现的问题

尽管ELISA测定的操作步骤非常简单，但有可能会影响测定结果的因素却较多，分布在测定操作的各步之中，尤以加样、温育和洗板为甚。为帮助大家分析查找测定中出现问题的可能原因，特对常见问题及原因归纳总结于下表。   
临床ELISA测定中可能会出现的问题及可能的原因问题 
可能的原因（非试剂盒本身的原因） 

1．弱阳性质控样本检测不出 温育的时间或温度不够；显色反应时间太短；所用配制缓冲液的蒸馏水有问题 
2．测定的重复性差 （相同样本两次测定结果不一致） 这是典型的由测定操作引起的问题，包括 
（1）加样本及试剂量不准；孔间不一致； 
（2）加样过快，孔间发生污染； 

（3）加错样本； 

（4）加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区； 
（5）不同批号试剂盒中组分混用； 
（6）温育时间、洗板、显色时间不一致； 
（7）孔内污染杂物； 
（8）酶标仪滤光片不正确； 

（9）血清标本未*凝固即加入，反应孔内出现纤维蛋白凝固或残留血细胞，易出现假阳性反应等。
 3．白板 
（阳性对照不显色） 
（1）漏加酶结合物； 

（2）洗板液配制中出现问题，如量筒不干净，含酶抑制物（如叠氮钠）等。 
（3）漏加显色剂A或B； 
（4）终止剂当显色剂使用。 

4．全部板孔均有显色 
（1）洗板不干净； 
（2）显色液变质； 

（3）加底物的吸光受酶污染； 
（4）洗板液受酶等污染。
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