造成血管生成素1（ANG-1）ELISA试剂盒失误的原因

下面分析血管生成素1(ANG-1)ELISA试剂盒操作中可能影响结果的原因，并给出相应的解决办法。
1 加样 可能原因： 1）血清或血浆标本分离不好即进行加样； 2）手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长（特别是室内温度较高时）； 3）加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。解决办法： 1） 标本为血清：将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。 2） 加样后及时放入孵箱。 3） 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。 4） 如果采用AT或其他全自动加样，选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。 5） 标本较多时，请分批操作。
2 孵育 可能原因： 1） 孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗*； 2） 孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗*。解决办法： 1） 贴封片或加盖； 2） 按说明步骤严格控制操作时间。 
3洗板 可能原因： 1） 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。 2） 采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不*；洗板针堵塞，抽吸不*；洗板不畅，导致洗板效果差。 3） 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法： 1） 保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干； 2） 合理安排，或多用几台洗板机。
4 显色 可能原因： 1） 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂； 2） 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法： 1） 显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用； 2） 加样时保持显色剂不外流； 3） A、B液应避免接触金属器械。 
5终止 可能原因如加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。

血管生成素1(ANG-1)ELISA试剂盒收集样品、处理及保存方法：
1.  血清：需使用不含热原和内毒素的试管，在操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心机离心30分钟取上清。
3.  细胞上清液：3000转 离心机离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心机离心10分钟取上清。
5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。