详细介绍
药敏改良罗氏培养基(比例法)说明书 | |||||||||||||||||||||||||
【产品名称】 【仪器设备】 本实验需要主要的仪器设备有生化培养箱、生物安全柜、接种环、麦氏比浊管()、移液枪(或移液管)、高压灭菌锅; 【操作方法】 1、菌液浓度标定及接种菌液的准备: 1.1 样品来源于液体培养基: 液体培养基分离培养结核分枝杆菌阳性或复苏培养的结核分枝杆菌,取培养2周以内菌液,经4000g,15分钟离心,取沉淀。沉淀用无菌0.5%Tween80生理盐水稀释,与标准麦氏比浊管(MacFarland )比浊,即配成1mg/mL的菌悬液; 1.2 样品来源于固体培养基: 挑取固体培养基上培养的结核分枝杆菌菌落,利用无菌的0.5% Tween80生理盐水溶解、稀释,与标准麦氏比浊管(MacFarland )比浊,即配成1mg/mL的菌悬液; 附:麦氏1号比浊管的制备方法: 0.1mL 1%氯化钡(BaCL2)加入9.9mL 1%硫酸(H2SO4),封口,比浊前摇匀。 1.3 菌悬液稀释制备接种浓度: 比浊后的菌悬液, 利用无菌的 0.5% Tween80 生理盐水10 倍比稀释, 稀释到接种浓度分别为: 10-2mg/mL和10-4mg/mL; 提示: ① 此操作要求在生物安全柜中进行; ② 菌液标定稀释前,要保证菌样没有污染,如果菌样中含有除了结核分枝杆菌,还存在其他抗酸菌,药敏结果不准确; ③ 样品来源于固体培养基,结核分枝杆菌*是在培养基上出现阳性克隆后,14天内挑取,进行药敏实验; ④ 0.5%Tween80生理盐水使用前,需要高压灭菌; 2、接种: 接种浓度分别为10-2mg/mL和10-4mg/mL,标准接种环取0.01mL,分别接种到对照培养基及含药培养基表面; 提示: 接种菌液尽可能均匀分散于培养斜面上; 3、培养: 接种后的培养基置于斜面处37℃培养,松开盖子,培养24~48h后,旋紧盖子继续培养,培养4周; 4周后,当对照培养管的菌体生长良好后,进行下一步菌体药物敏感性鉴定,报告结果;如果对照培养管菌体没有生长,重新实验; 【结果判定】 菌液接种药敏培养基,37℃培养4周后, (1)观察培养结果: ① 无菌落生长:对药物敏感 — ② 少于50个菌落:实际菌落数; ③ 50~100菌落: 1+ ④ 100~200个菌落: 2+ ⑤ 大部分融合 (200~500个菌落) 3+ ⑥ 融合(大于500个菌落) 4+ (2)计算耐药百分比: 如果耐药百分比大于1%者报告耐药;则认为受试菌对该抗结核药耐药;
|