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改良罗氏药敏培养基

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更新时间:2018-09-27 00:00:00浏览次数:810

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产品简介

药敏改良罗氏培养基(比例法)24支×1盒每盒包装两套药敏培养基,每套有两组,共24支

详细介绍

 药敏改良罗氏培养基(比例法)说明书

【产品名称】
    药敏改良罗氏培养基(比例法)
【产品用途】
    主要用于检测临床或实验室分离出的结核分枝杆菌,对抗结核一线药异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素的敏感性情况;
【主要成分
    本产品的主要成分是谷氨酸纳、磷酸二氢钾、 硫酸柠檬酸镁、丙三醇、新鲜鸡卵液、 2%孔雀绿水溶液以及抗结核菌抗生素,抗生素分别是异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)、链霉素(SM);
【实验原理】
    本产品主要利用比例法进行分枝杆菌药敏性实验。取液体培养基或固体培养基培养阳性的分枝杆菌,调整一定浓度,分别接种到不同药敏培养基中,37℃培养4周,如果空白对照培养管中,结核菌生长良好,进行下一步结核菌药物敏感性鉴定;如果结核分枝杆菌在空白对照培养管没有生长,需要重新实验。
药物敏感性鉴定:37℃培养4周后,观察结果并计算耐药百分比:

   
  如果耐药百分比< 1% 者报告敏感(S);耐药百分比≥1%者报告耐药(R);
【仪器设备】
    本实验需要主要的仪器设备有生化培养箱、生物安全柜、接种环、麦氏比浊管()、移液枪(或移液管)、高压灭菌锅;
【操作方法】
 1、菌液浓度标定及接种菌液的准备:
 1.1 样品来源于液体培养基:
       液体培养基分离培养结核分枝杆菌阳性或复苏培养的结核分枝杆菌,取培养2周以内菌液,经4000g,15分钟离心,取沉淀。沉淀用无菌0.5%Tween80生理盐水稀释,与标准麦氏比浊管(MacFarland )比浊,即配成1mg/mL的菌悬液;
 1.2 样品来源于固体培养基:
       挑取固体培养基上培养的结核分枝杆菌菌落,利用无菌的0.5% Tween80生理盐水溶解、稀释,与标准麦氏比浊管(MacFarland )比浊,即配成1mg/mL的菌悬液;
 附:麦氏1号比浊管的制备方法:
       0.1mL 1%氯化钡(BaCL2)加入9.9mL 1%硫酸(H2SO4),封口,比浊前摇匀。
 1.3 菌悬液稀释制备接种浓度:
       比浊后的菌悬液, 利用无菌的 0.5% Tween80 生理盐水10 倍比稀释, 稀释到接种浓度分别为: 10-2mg/mL和10-4mg/mL;

提示:
 ① 此操作要求在生物安全柜中进行;
 ② 菌液标定稀释前,要保证菌样没有污染,如果菌样中含有除了结核分枝杆菌,还存在其他抗酸菌,药敏结果不准确;
 ③ 样品来源于固体培养基,结核分枝杆菌*是在培养基上出现阳性克隆后,14天内挑取,进行药敏实验;
 ④ 0.5%Tween80生理盐水使用前,需要高压灭菌;
 2、接种:
    接种浓度分别为10-2mg/mL和10-4mg/mL,标准接种环取0.01mL,分别接种到对照培养基及含药培养基表面;
 提示:
    接种菌液尽可能均匀分散于培养斜面上;
 3、培养:
    接种后的培养基置于斜面处37℃培养,松开盖子,培养24~48h后,旋紧盖子继续培养,培养4周;
    4周后,当对照培养管的菌体生长良好后,进行下一步菌体药物敏感性鉴定,报告结果;如果对照培养管菌体没有生长,重新实验;

【结果判定】
    菌液接种药敏培养基,37℃培养4周后,
 (1)观察培养结果:
 ① 无菌落生长:对药物敏感 —
 ② 少于50个菌落:实际菌落数;
 ③ 50~100菌落: 1+
 ④ 100~200个菌落: 2+
 ⑤ 大部分融合
    (200~500个菌落) 3+
  ⑥ 融合(大于500个菌落) 4+
    (2)计算耐药百分比:
   

  如果耐药百分比大于1%者报告耐药;则认为受试菌对该抗结核药耐药;
提示:
    若高稀释度菌液(10-4mg/mL)在对照培养基上生长的菌落数少于20个菌落,则应从对照管传代培养,重复实验。
【注意事项】
 1、生物安全方面注意事项:
 ① 结核分枝杆菌操作要在无菌室中进行;
 ② 操作人员需进行特殊的培训,操作时,注意自身安全,防止实验操作过程中,结核菌感染;
 ③ 使用后的带有结核菌的器材,随时收集,实验结束后,灭菌处理;
 ④接种操作,严格按照无菌操作;
 2、产品使用方面注意事项
 ① 本产品仅用于结核分枝杆菌药物敏感性实验鉴定用,
 ② 本品在的保存方法下保存;
 ③ 超过有效期的产品禁止使用;
     产品如果有污染,禁止使用;
 ④ 在本品为无菌产品,在无菌环境下,开封后即时使用;
 3、废弃物处理:
 ① 菌体接触过的器材或废弃液体,均需121℃,高压灭菌20min后,方可丢弃;
 ② 实验操作后,操作台用3%苯酚或其他可靠消毒液擦拭后,再用紫外灯照射30min;
【贮存方法·有效期】
    2~10℃保存,有效期4个月
【包装规格】 
    24支×1盒
    每盒包装两套药敏培养基,每套有两组,共24支。每套包括:

 

含药物种类及浓度

*组

第二组

INH(0.2ug/mL)

1支

1支

RFP(40ug/mL)

1支

1支

EMB(2ug/mL)

1支

1支

SM(4ug/mL)

1支

1支

空白对照

2支

2支

 

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