ROSCO酵母样真菌药敏片

使用改良SHADOMY琼脂，适用于所有的抗真菌药，主要成分包括酵母氮琼脂基础，葡萄糖和天冬氨酸，通过磷酸缓冲液控制pH7.0。同时添加氯霉素控制细菌的污染。

采用NCCLS推荐的RPMI-1640琼脂也是可以的。

接种液的配制和接种

接种液的配制中，浓度度的控制是zui为重要的，接种液过浓会导致比咯类/咪唑类抑菌圈判度困难，而出现假阴性结果。对于大多数的菌株，接种液浓度为5X10⁵CFU/ml（先配0.5麦氏浊度，再用生理盐水1：1稀释）；

对于克柔氏念珠菌（C. krusei），先配0.5麦氏浊度，再用生理盐水1：10稀释；

对于隐球菌属（Cryptococcus），配1.0麦氏浊度，无需稀释。

在接种前，平板先置35℃干燥20-25分钟。对于9cm平皿吸0.5ml接种液，14cm平皿吸1.0ml接种液，倾注于平板表面，涂布均匀，用移液管吸走多余的液体。然后，平皿在35℃干燥10分钟，贴药片。zui终要求，在琼脂表面，菌落恰呈融合生长。

注：也可以按K-B法，用棉拭子沾取菌悬液，无需挤干，直接均匀涂布平板即可，这样的操作比较简单

培养条件

在多数情况下，应在35℃培养18-24小时后马上测量抑菌圈，因为培养时间过长会导致假耐药，特别是对于咪唑/比咯类药物。即培养过夜后应检查平板，如果抑菌圈清晰，应马上测量。如果对于某些菌株在培养过夜后未见生长，那么应再培养多24小时。而对于隐球菌属（Crytococcus spp）在30℃培养42-48小时。

判读标准

基本判读标准（局部治疗用）

注：

s 对于多烯类抗真菌药（包括两性霉素B和制霉菌素），测量无可见生长的清晰的抑菌圈，抑菌圈出现的菌落必须视为耐药突变株

s 对于比咯/咪唑类抗真菌药以及特比奈芬，在正常生长菌落形成的抑菌圈内，可能会出现由较小的部分被抑制的菌落形成的抑菌圈。测量时以正常生长的菌落形成的抑菌圈为准，其内部的较小菌落不应视为突变株。

s 对于氟胞嘧啶，同样以正常生长的菌落形成的抑菌圈为准，抑菌圈内的单个菌株通常为耐药突变株（重新分离和试验）。

我们认为对于从严重的系统感染病人分离到的酵母菌，应遵循更为严格的判度标准。因为系统感染分离到的一些菌株（如热带念珠菌，克柔氏念珠菌，光滑拟酵母，啤酒酵母）对咪唑/比咯类药物的敏感性降低，同时，我们参照NCCLS提供的MIC折点标准，对于这些分离株，在SHADOMY平板或RPMI1640平板上，我们建议使用以下判度标准：

严重系统性感染株判度标准

注：氟胞嘧啶10ug推荐用于黑曲霉试验，而氟胞嘧啶1ug适用于念珠菌和其它酵母菌。

对比咯类药物的耐药是一种渐进的现象，耐药是微小突变的不断累积的结果。在任何比咯类药物的选择压力下，对氟康唑的MIC逐步上升，或者说抑菌圈直径减少。如果分离株对氟康唑的MIC＞4.0ug/ml，那么该株对其它比咯类药物的敏感性也将下降，但不同菌株的下降情况不尽相同。如果分离株对氟康唑的MIC≤2.0，则对其它比咯类药物依然敏感。

酵母纸片药敏的质控

0.5麦氏浊度，1：1稀释，培养18-24小时