1.2 RNAi载体构建服务

1.2 RNAi载体构建服务
诺百优势
质量保证：针对一个基因的不同位置设计4条miRNA序列，在转染效率>80%的前提下，我们保证至少2个克隆在mRNA水平
达到70%以上的Knockdown效率
多种平台载体可供选择：shRNA载体，miRNA干扰载体（第二代干扰载体），miR-shRNA载体（第三代干扰载体）
利用绿色荧光蛋白（GFP）和感兴趣的RNAi序列协同表达，方便追踪
可将多个RNAi序列串联到同一表达载体中并同时表达，进行多个靶基因的同时干扰
原理
RNA干扰（RNAi）是有效抑制基因表达以及研究各种细胞类型中蛋白质功能的*方法。相比传统的短/小干扰RNA（siRNA），
使用载体进行RNAi实验*地扩展了实验的可能性。
采用载体技术能够：
实现瞬时或稳定的靶标抑制
在任何类型的细胞（甚至是难转染的细胞、原代细胞和非分裂细胞）中执行 RNAi
通过诱导型RNAi表达来调控基因抑制
选择稳定表达RNAi序列的纯细胞群
通过组织特异性启动子控制体内基因表达

我们的RNAi载体构建，有以下选择：

1） shRNA干扰载体构建：短发卡RNA（shRNA）是可以克隆到表达载体并表达短的干扰RNA（siRNA，19 - 21个核苷酸的
RNA双链）的DNA分子。我们可根据靶标设计短发卡RNA （shRNA）序列并将其克隆入shRNA载体上。
2） miRNA（microRNA）干扰载体构建：属于第二代RNA干扰载体平台，拥有更高干扰效率和RNA干扰片段设计成功率。
miR RNAi表达载体采用Pol II启动子表达人工设计的miRNA，后者从长的转录本被加工，进而导致特异性的mRNA的降解。
3） shRNAmir是用19nt的siRNA序列替代miRNA中的作用序列，保持miRNA的环和双臂结构。基于miRNA mir-30或miRNA
mir-155双臂结构的shRNAmir质粒载体RNAi效果更好：shRNAmir是目前效果的RNAi产品形式。
服务流程
1） 客户提供：基因的Accession Number
2） 针对特定基因，设计RNAi序列；合成该序列并退火生成双链DNA
3） 将DNA与RNAi载体相连，连接物转化大肠杆菌
4） 测定全长序列以鉴定序列的正确性；制备甘油菌
5） 提供数据分析和报告给客户
6） 我们提供：构建好的RNAi表达载体和相应的甘油菌