CS301-100 Western及IP裂解液

Western及IP细胞裂解液 100ml  CS301-100

IP Lysis Buffer

简介：

Western 及 IP 裂解缓冲液，是一种非变性条件下的裂解液,为您提供完整的组织、细胞总蛋白制备方案。裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP和Co-IP等实验。

(一) 细胞样品

1.取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的＊终浓度为1 mM。

2. 贴壁细胞：去除培养液，用PBS或生理盐水清洗细胞一遍。按照6孔板每孔加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。

3.悬浮细胞：离心收集细胞,按照6孔板每孔细胞加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。

4.充分裂解后，12000g 4℃离心3- 10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

组织样品：

1.取 50-100 mg 组织,把组织切成细小的碎片。

2. 取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的＊终浓度为1 mM。

3.按照每20 mg组织加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。

4.用玻璃匀浆器匀浆，直到 95％的细胞被破碎

5.充分裂解后，12000g 4℃离心3- 10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。