荧光素酶检测

转录因子的 DNA 结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的调控作用。荧光素酶报告基因实验就是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种检测方法。

荧光素酶（Luciferase）：是能够催化底物氧化发光的一类酶的统称。

荧光素酶的种类很多，其中应用较为广泛的是萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase，FLUC）和海肾荧光素酶（Renilla luciferase，RLUC）

在ATP、Mg2+、O2存在的条件下，虫荧光素在虫荧光素酶的催化下氧化发光，发光颜色为黄绿色。

（1）在质粒中，将靶启动子（或其他要研究的基因调控元件）插入到荧光素酶报告基因前方，构建成报告基因质粒。

（2） 将可以表达要检测的转录因子的质粒与报告基因质粒共转染细胞，如果此转录因子能够激活靶启动子，则荧光素酶基因就会表达，荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。

（3）加入特定的荧光素酶底物，荧光素酶与底物反应，产生荧光，通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性，从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作用。