D0405 HiFi One-Step RT-PCR Mix(电泳)试剂

HiFi One-Step RT-PCR Mix(电泳)试剂本试剂采用稳定高效的RT-PCR预混体系，是以RNA为模板进行一步法RT-PCR的专用试剂。其原理为用基因特异性引物进行反转录反应，获得第一链cDNA（不可使用Oligo（dT）或Random Rimer合成第一链cDNA），再使用基因特异性正向引物和反向引物进行PCR扩增，在同一反应体系中一步完成从反转录到PCR的全部过程。反应体系中已含有电泳所需的指试剂（蓝色和黄色），反应后可以直接进行电泳。

在本试剂中，将耐热M-MLV反转录酶、Rnase Inhibitor、Hotstart高保真DNA聚合酶以及稳定剂等配制成50×One-Step Enzyme Mix预混液；反应Buffer、dNTP以及电泳指示染料配制成5×HiFi One-Step RT-PCR Buffer，因此使得操作更加简单便，扩增产物可用于平端克隆和DNA测序。

组分

组分名称250T

50×One-Step Enzyme Mix100 μl

5×HiFi One-Step RT-PCR Buffer1 ml

RNase Free H2O1 ml×3

注意：1.50×One-Step Enzyme Mix粘度高，第一次使用之前要离心收集至反应管底部，吸取时应缓慢小心。

2.由于使用了Hotstart高保真DNA聚合酶，反应配制可在常温进行，但各组分应-20°C保存。

主要特征

耐热M-MLV反转录酶可在55℃反应能更好的打开复杂二级结构，只需10min即可完成逆转录。

DNA聚合酶为热启动型高保真酶，能够有效的抑制非特异性反应且具有较高的校正活性，酶激活仅需2min。

具有宽泛的模板量兼容性，10 ng~1μg都可有效扩增。

反应过程中无需开盖，避免了操作过程中的污染危害。

储存

请置于-20°C，可保存2年；避免反复冻融。

恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR

仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，

NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

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