A0605 2XRAPA HiFi PCR Mix试剂

2XRAPA HiFi PCR Mix试剂

特征
超保真扩增：~280倍Taq的保真性能，是载体构建、点突变、NGS模板扩增、基因合成的最佳用酶。 快速扩增：具有6kb/min的扩增能力。 长片段扩增：质粒、λ DNA 等简单模板可以有效扩增>20 kb，基因组可以有效扩增>8 kb，cDNA可以有效扩增>8kb。
储存
长期储存置于-20°C以下，可保存2年，避免反复冻融；短期使用置于4°C（3个月）保存，一经融化后请放置于4°C，勿再冻存。
反应实例
1. 长片段扩增能力
分别以λDNA、human gDNA、human cDNA为模板，使用RAPA HIFI PCR Mix进行扩增，循环数统一为28 cycles，结果如上图所示，对于不同种类DNA模板的长片段靶基因，RAPA HIFI PCR Mix均有良好的扩增性能。
常见问题及解决方案：
无扩增或产量低 循环数 退火温度 模板DNA纯度和用量 延伸时间 引物用量 引物设计 增加循环数至35~40cycles 以2℃为单位降低退火温度 使用高纯度的模板DNA，使用合适的模板量。 适当增加延伸时间 在0.1μM~0.5μM之间选取合适的引物量 重新设计优化引物 出现杂带或Smear 退火温度 引物浓度 循环数 模板DNA使用量 引物 以2℃为单位提高退火温度 降低引物浓度至0.2μM 降低循环数至25~28cycles 使用合适的模板量，不要过多使用 重新设计优化引物

恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

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ThermoStable V Reverse transcriptase（200U/ul）(无甘油)

TGIRT-III Reverse transcriptase (10pmol/ul) 50ul

RNaseOUT-RNase Inhibitor (40 U/μl)

RnaseOUT-RNase Inhibitor(80U/ul), 无甘油

Murine Rnase inhibitor(40U/ul)

Murine Rnase inhibitor(80U/ul), 无甘油

Equi-phi29 DNA Polymerase

Klenow Fragment(exo-)

Bsu DNA聚合酶 大片段

Sau DNA Polymerase

T4 DNA Polymerase (exo-)

Hi T7 RNA Polymerase

TdT末端转移酶(Terminal Transferase)

加A聚合酶（E.coli）

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dNTP Mixture (10 mM each)

rNTP Mixture(25 mM each)

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