细胞3D打印机：解冻细胞

细胞3D打印机：解冻细胞

概述

正确解冻细胞对细胞培养健康至关重要。通常，特定的细胞系将具有制造商提供的特定解冻方案。这是解冻细胞的一般方案，不附带制造商的解冻方案。请注意，不遵循制造商的说明可能会导致细胞死亡或功能不正常。

材料

• 冻存细胞瓶

• 细胞培养基

• 组织培养瓶

• 水浴/珠浴 （37°C）

• 70%乙醇

• Kimwipes

• 生物安全柜 （BSC）

• 培养箱（37°C，5% CO2)

• 自动移液器进样器

• 血清移液管

• 微量移液器

• 微量移液器吸头

方法

1. 在水/珠浴中将细胞培养基加热至 37°C;

2. 请记住用 70% 乙醇喷洒所有东西，并在进入 BSC 之前用 Kimwipes 擦拭;

3. 检查冷冻保存小瓶中的细胞数量，并用相应量的温细胞培养基制备适当数量的烧瓶。细胞接种密度因每种细胞类型而异，但通常为 2,000-5,000 个细胞/厘米2.培养基量也因烧瓶大小而异，但建议每厘米使用 0.2 mL 培养基2.在下面找到有用的公式;

• 烧瓶数 = 细胞数/细胞接种密度/烧瓶面积（厘米）2

• 介质量 =（烧瓶面积，单位为厘米2）*0.2 毫升

1. 从液氮中取出细胞瓶，将其浸入水/珠浴中直至盖子不超过 2 分钟;

2. 当小瓶的侧面解冻但其中心保持冻结时取出小瓶;

3. 喷洒所有培养基和移液管，并将它们移入 BSC;

4. 将 1 mL 培养基移液到细胞瓶中;

5. 上下移液器溶液，确保细胞分布均匀;

6. 将相应量的细胞溶液移液到每个含有细胞培养基的烧瓶中。使用以下公式计算每个烧瓶中要添加多少细胞溶液;

• 接种细胞溶液量 = 细胞溶液体积/培养瓶数

1. 轻轻摇晃烧瓶，不要让溶液接触过滤器盖。如果过滤器与液体接触，无菌屏障可能会被破坏，并且您可能已将细胞培养物暴露于外部病原体;

2. 给烧瓶贴上标签。好包括以下信息;

• 您的姓名字母和通过日期（例如：如果您的姓名字母是 YN，日期是 MM/DD/YYYY，请将其标记为 YNYYYMMDD）

• 细胞系和传代数（如果您的小瓶是 Pn，它们现在将是 Pn+1）。

1. 将烧瓶放入培养箱中;

2. 按照此协议，每两到三天喂养一次细胞;

3. 遵循此方案的传代细胞。

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