猴多巴胺β羟化酶(DβH)ELISA试剂盒
参考价 | ¥1450.00-¥2500.00 |
- 公司名称 上海笃玛生物科技有限公司
- 品牌DUMABIO/笃玛生物
- 型号
- 所在地上海市
- 厂商性质经销商
- 更新时间2024/1/26 10:15:32
- 访问次数 96
96T | 2500.00元 | 1000 盒可售 |
48T | 1450.00元 | 1000 盒可售 |
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供货周期 | 一周 |
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猴多巴胺β羟化酶(DβH)ELISA试剂盒
ELISA试剂盒组成
试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
说明书 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片(48) | 2片(96) | |
密封袋 | 1个 | 1个 | |
酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
标准品:36U/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
酶标试剂 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
样品稀释液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
说明书 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片(48) | 2片(96) |
ELISA实验原理
本试剂盒基于检测样本的特异性抗体包被酶标板,加入待测样本,样本与包被在酶标板上的特异性抗体结合,形成免疫复合物。清洗后加入酶标二抗,与免疫复合物结合,形成完整的三明治复合物。再加入底物溶液,底物在酶的作用下变色,颜色的深浅与样本的浓度呈正相关。最后加入终止液,使反应停止,在450nm波长下测量各孔的光密度值(OD值),通过标准曲线计算样本的浓度。
操作步骤
1. 加样:设置空白孔、标准孔和待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl。注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。每次实验都应制作标准曲线。如果样品浓度过高,可以用样品稀释液进行稀释,使样品符合试剂盒的检测范围。
2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加生物su标记抗体工作液 100μl(取1μl生物su标记抗体加99μl生物su标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。
3. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物su标记抗体工作液) 100μl,37℃,60分钟。温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。
4. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
5. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
6. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后15分钟以内进行检测。
猴多巴胺β羟化酶(DβH)ELISA试剂盒
ELISA试剂盒实验数据的计算处理方法
1、拟和曲线:
输入第一行: 浓度值, 如0 10 50 100 400
输入第二行:该浓度下的调整后的od值,如0 0.586 1.397 1.997 3.42
选择这些输入的数据,用插入里的图表按钮,进入图表向导,在“标准类型”中选择“xy散点图”;在“子图表类型”中选择“折线散点图”,按“下一步”;选择“系列产生在行”,按“下一步”;数据标志,可以填写:如数据y轴,OD值;数据x轴,浓度;按下一步,点击完成。可得曲线图。
单击曲线,按右键,选择“添加趋势线”,在类型中,选择多项式;在选项中,选择显示公式,选择显示R平方值。
得到公式和R平方值。
也可以用上面说的方法: 双击图表,把它输入到图表的数据中,就可以拟和曲线。
2、计算浓度:
第一次实验:
标准曲线为:
y = -4E-05x2 + 0.026x
R2 = 0.9745
为例,已知OD值,计算浓度。
由于y = -4E-05x2 + 0.026x,可以得到:
4E-05x2 -0.026x +y=0
ax2 +bx +y=0
操作注意事项
1. 试剂盒保存在 2-8℃,使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3. 浓度为 0 的标准品可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍,终结果乘以5才是样本终浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
6. 若中英文说明书有误,请以中文说明书为准。
7. 20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按 1:20 稀释,即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。
8. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
产品包装:盒装
性状:瓶装液体
规格:96T/48T
保存条件:2-8℃
保存期限:6个月
运输条件:2-8℃低温运输,用干冰或者生物冰袋低温运输。
组织匀浆
1) 用预冷的PBS(0.01M,PH7.4)冲洗组织以除去表面残留的血液或杂质(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果)。
2) 将组织块称重,然后切成尽可能小的碎块,以便充分匀浆。
3) 加入适量的预冷PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂),用玻璃匀浆器在冰上或冰浴中充分匀浆。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。
4) 将匀浆液吸入离心管中,2-8℃下以5000×g离心5分钟,收集上清液,保存至-20℃或-80℃,避免反复冻融。
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