TSKgel色谱柱用于ADC药物质控分析

抗体偶联药物（ADC）是一种将抗癌药物等偶联到抗体中的生物药物，近年来，以ADC和双特异性抗体为代表的新型抗体药物的研发进展迅速，目前全球已有16款ADC药物被批准上市。此外，研发人员还开始探索均一性更高、副作用（脱靶毒性）更少的第三代ADC药物，因此ADC的纯化及质控分析方法将变得日趋重要。

1. ADC的关键质量属性及其分析法
ADC的关键质量属性及其分析法如表1所示。其中，非变性色谱的特点是在分离时可保持抗体的高级结构和活性。在分离药物和抗体的偶联比 (DAR) 不同的成分时，常使用疏水色谱法。

此外，还可以使用挥发性流动相的SEC/MS进行DAR分析1）。作为与抗体ADCC活性相关联的分离，研发人员还探讨了通过亲和色谱法来分离ADC2，3）。另有文献称在抗体、寡核苷酸偶联物 (AOC) 的偶联比分析中使用了阴离子交换色谱 4）。

表1. ADC关键质量属性及其分析法

                  TSKgel色谱柱用于ADC药物质控分析                            

* MRM: Multiple reaction monitoring

Ref.: G. Petrie et al, White paper, 2017, https://www.eag。。ｃｏｍ/wp-content/uploads/2018/01/M-028517-Keys-to-Rapid-IND-Submission.pdf

2. ADC非变性色谱分析的分离模式
分析ADC时，为了抑制有效载荷偶联而增加的疏水性，即使是在非变性条件下，有时也需要在流动相中添加异丙醇和乙腈等有机溶剂 (5～25%)。

表2中归纳了ADC非变性分析、变性分析的分离模式，以及各自的分离对象和特征。

表2. ADC非变性分析/变性分析的分离模式

TSKgel色谱柱用于ADC药物质控分析  

3. ADC药物的SEC分析
尺寸排阻色谱法通常用于分离ADC的二聚体、多聚体和片段。下图是使用TSKgel UP-SW3000分析ADC的谱图。

图2是ADC药物在不同SEC色谱柱上的分离情况比较。相比其他两款SEC色谱柱，TSKgel UP-SW3000在多聚体的分离上可以获得更多组分信息。

4. ADC的DAR值分析
在分离药物和抗体的偶联比不同的成分时，常使用分辨率高，非多孔型基质HIC色谱柱。东曹公司最近上市的新型HIC色谱柱TSKgel HIC-ADC Butyl提高了ADC的分离选择性，能够实现更高效的分析。

从谱图中看到，TSKgel HIC-ADC Butyl分离ADC模拟物 (DAR=0,2,4,6,8) 的峰间距更宽，比市售其他品牌的HIC色谱柱具有更宽的分离范围和更出色的分离度。