非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测试剂盒1
- 公司名称 山东绿都生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型号
- 产地 山东绿都
- 厂商性质 生产厂家
- 更新时间 2023/4/27 10:40:19
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山东绿都生物科技有限公司成立于2005年，坐落于孙子故里山东省滨州市，位于山东省滨州国家级经济技术开发区黄河二路169号绿都生物工程高科技园内，占地面积66600多平方米，是投资2.6亿元以上按照国际兽药GMP标准兴建的新型兽用生物制品高科技企业。
在各级政府部门、国内外客户、社会各界关心支持下，全体员工团结拼搏，公司迅速成长为世界畜禽用蜂胶疫苗研发生产基地、国家政府采购猪瘟疫苗定点生产基地、国家发改委绿色农用生物制品产业化项目示范基地、滨州国家农业科技示范园区综合示范园区、中国兽药产业十大著名品牌、中国科技创新型中小企业100强、山东省高新技术企业、山东省重合同守信用企业、山东省扶贫龙头企业、农业产业化省级重点龙头企业……公司的科学跨越发展，引起了国内外各方面的密切关注，国内外有关机构指出：“绿都生物是一个具有自主创新研发能力，并能够研制生产出兼具创新性和高性价比产品的公司” ；“绿都生物是一个全球有投资发展前景的生物技术公司之一”。
公司新建了包括组织毒、胚毒、细胞毒、细菌毒四条灭活疫苗生产线和组织毒、胚毒、细胞毒、细菌毒四条弱毒疫苗生产线、诊断液、精制卵黄抗体二条生产线，生产工艺先进合理，涵盖了蜂胶、氢氧化铝胶、白油三大佐剂系列产品。是世界上绿色环保型畜禽用蜂胶疫苗研究开发生产基地。公司还建有5000多平米的动物实验室。公司拥有自动高密度发酵系统、细胞生物反应器、自动收获接种机、汉显智能箱体孵化机、微电脑液体灌装机、大型冻干机等200余台件先进生产设备和精密电子天平、冷冻高速离心机、PCR仪、凝胶成像系统、荧光显微镜、倒置显微镜等100余台精密监测仪器。设计生产能力为年产各种生物制品200多亿头羽份。2006年8月20日一次性高分通过农业部兽药GMP验收，2022年5月顺利通过农业部新版兽药GMP复验收。
食品安全检测事业部成立于2011年，秉承“品质至上、客户第一、追求卓越”的生产服务宗旨，“自强不息、艰苦奋斗、务实创新、追求卓越”的精神，不忘初心，目标坚定，做最好的产品，服务于行业客户。食品安全检测事业部现有保健品类、激素及类固醇类、重金属类、喹恶啉类、消炎镇痛类、水产违禁类、牛羊马类、农药毒品类、禽病类、生理活性物、体外诊断IVD炎症、细菌含传染病类等多个品种。
主要产品有真菌毒素免疫亲和柱、真菌毒素嵌合酶联免疫检测试剂盒、真菌毒素胶体金定性检测卡、量子点定量检测卡、食品安全定量/定性检测箱、食品安全抗原及单克隆抗体、单克隆及多克隆抗体制备试剂耗材及相关仪器、食品安全与动物疫病类抗原及单克隆抗体等约1200种，部分产品已经出口到德国、俄罗斯、伊朗、英国、美国等多个国家。
地址：山东省滨州市国家经济技术开发区黄河二路169号 绿都生物工程高科技园
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疫苗、兽药，食品安全检测抗原抗体试剂盒 、亲和柱、检测卡、生产原材料，动物疫病检测抗原抗体检测卡试剂盒
| 供货周期 | 一周 | 应用领域 | 生物产业 |
|---|
非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测试剂盒（免提法）
试剂盒应用
本试剂盒主要用于动物组织及血液中非洲猪瘟病毒DNA的扩增。将组织液（包括组织研磨液、细胞悬液、血液、血清、精液、唾液、尿液等）、组织块以及环境和拭子等样本进行处理后，可直接用于扩增。本试剂盒中使用的Rapid DNA-Lysis采用du特配方，能够快速高效的裂解各种常见样本，无需反复离心，从而获得高质量的DNA。试剂中引入了dUTP/UDG防污染系统，可消除扩增污染对qPCR的影响。
本试剂盒仅供研究使用，不可用于食品、化妆品等领域。
试剂盒组成
组分 | （50次） |
Rapid DNA-Lysis | 1 mL |
荧光PCR反应液 | 1 mL |
样品稀释液 | 1.5mL×4 |
阳性对照 | 50 μL |
阴性对照 | 50 μL |
说明书 | 1份 |
保存条件
-20ºC保存。
使用前将Rapid DNA-Lysis室温充分混匀；荧光PCR反应液、阳性对照溶解后需置于冰上。
需要准备
荧光定量PCR仪、恒温金属浴、离心机、移液器
使用方法
一、不同样品的处理方法
1. 组织液的处理
（1）组织液包括组织研磨液、细胞悬液、血清、血液、唾液、尿液、精液等。取10 μL组织液置于离心管中。
（2）加入20 μLRapid DNA-Lysis。
（3）混匀。
（4）置于55℃作用5分钟，加入100μL样品稀释液，混匀后，取上清。
2. 组织块的处理
（1）用眼科剪取半颗米粒大小的组织块（< 3 mm3），并将组织块剪成肉泥状。
（2）加入20 μL Rapid DNA-Lysis。
（3）混匀。
（4）置于55℃作用5分钟，加入100μL样品稀释液，混匀。
（5）8000转离心30秒取上清。
3. 环境样本和拭子的处理
（1）用棉签反复涂抹桌面、鞋底、头发、车轮等表面，并将棉棒浸泡在500ul（生理盐水、PBS或水）中，作用5分钟，将棉签中液体挤压至EP管中。
（2）吸取10 μL(1)中液体，加入20 μLRapid DNA-Lysis。
（3）混匀。
（4）置于55℃作用5分钟。加入100μL样品稀释液，混匀取上清。
4. 提取对照的处理
（1）在上述1,2,3样品处理的同时，取10 μL（生理盐水、PBS或水）加入20 μL Rapid DNA-Lysis。
（2）混匀。
（3）置于55℃作用5分钟，加入100μL样品稀释液，混匀取上清。
二、在DNase free 的离心管中配制荧光定量PCR反应体系
阴性对照（20 μL） | 待检样品（20 μL） | 阳性对照（20 μL） | 提取对照（20μL） | |
荧光 PCR反应液 | 18 μL | 18 μL | 18 μL | 18 μL |
待检样品 | - | 2 μL | - | - |
阳性对照 | - | - | 2 μL | - |
阴性对照 | 2 μL | - | - | - |
提取对照 | - | - | - | 2 μL |
三、按照以下方法设定荧光定量PCR反应
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
污染消化 | 37oC | 2min | 1 |
预变性 | 95 oC | 2min | 1 |
变性 | 95 oC | 10 s | 40 |
退火延伸 | 60 oC | 30s |
设置荧光基团为Fam，淬灭基团为BHQ，参比基团为None。退火延伸步骤中采集荧光数据。
四、结果判定
阳性对照：Ct值<35且有明显扩增曲线，呈典型的S型曲线。
阴性对照：无Ct值，无明显扩增曲线，结果成立。
待检样品：Ct值>40或无，则为阴性。
35<Ct<40，且有S形扩增曲线，则为可疑。若无明显扩增曲线，则为阴性。可疑样品需重新处理样品后再次检测，若Ct<40且出现S形曲线，则为阳性，反之为阴性。
Ct≤35，且有明显的S形扩增曲线则为阳性。若扩增曲线呈不规则形状需重新检测。
注意事项
（1） 所有试剂应按照规定温度储存。请勿反复冻融。
（2） 检测过程应按照分区（试剂准备区、样本制备区、核酸扩增区）进行。各区物品专用，不得交叉使用，避免污染。
（3） 检测前后均需要对操作区进行消毒，消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除剂等。耗材（包括吸头、PCR管）均需要无酶处理或使用商品化的无酶耗材。
（4） 为了避免对检测结果的影响，应避免使用含有荧光物质的手套，避免用手直接接触各项试剂，预防交叉污染。
（5） 采集全血时应当使用jv橼酸钠抗凝，而不要使用肝素、EDTA。
（6） 样品处理过程中应当防止交叉污染，推荐按照以下加样顺序加样，依次为阴性对照、待检测样本、阳性对照。
（7） 使用阳性对照时应特别注意防止污染。
（8） PCR反应完成后，用完的PCR管直接丢弃，严禁在实验室开盖，以防止气溶胶污染。
（9） 为防止试剂盒污染，请勿将不同批号试剂盒混用。
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