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文化媒体

1.培养基（Neurobasic®/B27®/GutaMAX）有多长™) 稳定的

我们的培养基在4摄氏度的黑暗中保存长达6个月。为了防止氧化，介质可以等分成更小的体积，并在4摄氏度下储存。

2.我需要多长时间进行一次媒体交流？

我们每3到4天更换1/2的培养基，但这在一定程度上取决于细胞密度。请参阅INVITROGEN（LTI）焦点16:6。如果细胞密度高于500/mm2，则每2天改变1/2。

3.NbActiv1与NbActiv1有什么区别™ 和NbActiv4®？

NbActiv4®含有与NbActiv1相同的成分™ 加上固醇、雌激素和肌酸。NbActiv4®主要用作电生理介质。

4.在对海马培养物进行电镀时，通常在NbActiv1中添加25μM氨酸盐™ （Neurobasic®/B27®/谷氨胺最大残留量™) 或NbActiv4®（Neurobasic®/B27®/GlustaMAX

™/固醇/雌激素/肌酸）培养至第4天。氨酸的用途是什么？

它有助于海马神经元的发芽和提高生存能力。DIV4之后，应使用不含氨酸的培养基进行半培养基交换。

5.如果氨酸盐被排除在外，会有问题吗？

在DIV4时，你的生存率会降低约30%。

6.如果我在NbActiv1中平板细胞™ 我可以将介质更改为NbActiv4®吗？

是的，在文化中的任何时候，媒体都可以从NbAcitv1改变™ 至NbActiv4®。然而，事实并非如此。接种NbActiv4®的细胞不应改为NbActiv1™.

7.我需要什么额外的用品来维持培养物？

每份订单包括足够的培养基，可以开始培养并维持4或5天。除此之外，您还需要更多的培养基，我们可以通过Invitrogen单独提供完整的即用配方。您还需要您选择的镀膜玻璃或塑料基材，我们建议使用聚-D-赖氨酸作为基材。除此之外，您还需要解离溶液，我们推荐我们的木瓜蛋白酶和Hibernate®E-Ca以及火抛光移液管。我们将所有这些用品包含在我们的完整培养工具包中。

8.我应该在电镀介质中补充抗生素/抗真菌药物吗？例如：笔/链球菌/真菌唑还是大霉素？

我们通常在没有抗菌抗生素和抗真菌药物的情况下进行培养，并取得了良好的成功。这有三个优点：

首先，当出现污染时，更容易确定污染的来源。第二，如果你使用抗生素，当你感染时，很难摆脱。第三，抗生素已被证明可以激活神经元中的癫痫样爆发活动。抗生素的使用是一种常见的做法，其类型和浓度取决于最终使用者。

Hibernate®媒体

Hibernate®、Neurobasic®和B27®仅用于研究目的，由Invitrogen公司生产。Hibernate®、Neurobasic®和B27®是Invitrogen公司的商标。

1.Hibernate®媒体稳定多长时间？

我们的Hibernate在4摄氏度的黑暗中保存长达1年。为了防止氧化，介质可以等分成更小的体积，并在4摄氏度下储存。

2.你总是添加B27®和GlutaMAX吗™ 到Hibernate®，还是只在Hibernate®中保持细胞的活力？

几乎总是这样。请参阅Brewer和Price（1996）PM:8856709的图1。在37℃的环境二氧化碳中，Neurobasic®/B27®/Gutamax中的LD50™ 为24小时，而在Hibernate®/B27®/GutaMAX®中则超过3天。

3.我们可以提供定制的Hibernate配方吗？

是的，我们可以提供Hibernate的自定义配方。

4.Hibernate的其他用途包括：

转基因小鼠基因分型过程中的脑储存。

将脑组织运送给合作者。

基底

1.我的神经元更多地以细胞簇或团块的形式生长，而不是孤立的。怎么了？

这意味着细胞与自身的粘附比与基质的粘附更紧密。最有可能的问题是基板制备不良。将您的方案与聚-D-赖氨酸的推荐制备和基质涂层进行比较。另一种可能性是镀层密度可能过高。

2.关于聚-L-赖氨酸与聚-D-赖氨酸，我认为使用聚-D-赖氨酸是因为如果它分解为赖氨酸时，D赖氨酸就不能被细胞使用。这是真的吗？

这就是理论。在一些早期研究中（Brain Res.494:65（1989）），我们发现差异不大。

3.一些研究人员使用聚乙烯亚胺（PEI）代替聚-D-赖氨酸（PDL）。一个比另一个有优势吗？

PEI比PDL便宜。我们在PEI方面没有取得太大成功，但Mark Mattson在开始在Neurobasic®/10%血清中培养后一直在使用它。报告显示，神经元存活率或刺突率没有显著差异。

Soussou WV，Yoon GJ，Brinton RD，Berger TW（2007）在表面处理的多电极阵列上培养的海马神经元的神经元网络形态和电生理学。IEEE跨生物识别工程54:1309-1320。下午：17605362

Brewer GJ，Cotman CW（1989）海马神经元在低密度特定培养基中的存活和生长：三明治培养技术或低氧的优势。脑研究494:65-74。下午：2765923。

预涂PDL培养皿

1.你能推荐任何品牌的预涂层组织培养瓶或制备用于初级神经元生长的组织培养瓶的方法吗？

我们已经确定，细胞培养塑料或玻璃上的聚-D-赖氨酸涂层在涂层后开始失效。涂层玻璃片在14天后失效，涂层塑料在10天后失效。我们怀疑一些预涂板的工作效果令人满意，但我们的经验是，有几种预涂板会导致初级神经元的粘附性和存活率差。因此，我们建议您涂覆自己的基底，并在一周内或上述几天之后使用。

2.你们销售预涂文化用品吗？

是的，我们销售PDL涂层烧瓶、井板和卡瓦。我们在一夜之间给它们涂上涂层，第二天再发货，以便隔夜送达。我们建议您在一周内使用这些产品。

新鲜纸巾

1.你们提供什么年龄的纸巾？

我们的标准组织是胚胎第18天或孕妇（3-4个月大）的成年组织。所有其他组织年龄均可特殊订购，交货期为2-3周。

Wolburg H，Neuhaus J，Kniesel U，Krauss B，Schmid EM，Ocalan M，Farrell C，Risau W（1994）血脑屏障内皮细胞紧密连接结构的调节。组织培养、第二信使和共培养星形胶质细胞的影响。《细胞科学杂志》107（第5期）：1347-1357页。下午：1692329

Risau W，Engelhardt B，Wekerle H（1990）血脑屏障的免疫功能：

大鼠脑微血管内皮细胞的蛋白（自身）抗原。细胞生物学杂志110:1757-1766。下午：7929640关于从脊髓中分离运动神经元的更多信息，M.Das、J.W.Rumsey、N.Bhargava、M.Stancescu和J.J.Hickman。一种确定的神经肌肉接头的长期体外组织工程模型。生物材料31（18）：4880-48882010。下午：20346499

2.你保证每个小瓶有多少来自皮层和海马体的神经元？

海马神经元的数量保证为100万，皮层神经元的数量则保证为200万。其他组织类型的数量不同。

3.有什么保证可以保证动物的大脑和脊髓组织是根据美国国立卫生研究院批准的方案获得的？

我们的动物方案233-08-013于2020年7月4日获得南伊利诺伊大学医学院实验动物护理和使用委员会的批准。

对于美国国立卫生研究院的拨款，脊椎动物部分：

保证编号为A-3209-01。

F.脊椎动物

用于原代培养的海马、皮层和其他大脑和脊髓神经元将从胚胎或出生后早期的大鼠或小鼠的大脑中获得。使用氟烷麻醉后，将对大脑进行解剖。戊比妥将用于大鼠的心脏。小鼠将在麻醉状态下被送上断头台或折断颈部。这些乐死方法与美国兽医协会乐死问题小组的建议一致。

通过从动物身上分离神经元，可以研究比整个动物研究更多的实验变量，从而减少对动物的需求。大鼠和老鼠的大脑是所有动物大脑中研究得好的。

平均住房需求估计为2天，足以让啮齿动物从交通创伤中恢复过来。动物将由SIUSM实验动物医学中心护理，该中心经AALAC认证，有10名工作人员，由Helen Valentine，D.V.M.，MS指导，经DACLAM认证

使用氟烷麻醉后，将对大脑进行解剖。戊比妥将用于大鼠的心脏。小鼠将在麻醉状态下被送上断头台或折断颈部。这些乐死方法与美国兽医协会乐死问题小组的建议一致。因此，这些程序将动物的使用限制在进行有科学价值的研究时不可避免的范围内，并将动物的不适、痛苦和痛苦降至低。