细胞上清外泌体提取纯化试剂盒

细胞上清外泌体提取纯化试剂盒简介

外泌体是含有RNA和蛋白质的小囊泡（30-150nm），由培养物中的各种类型的细胞分泌，并在包括血液，唾液，尿液和母乳在内的体液中大量存在。外泌体被认为是细胞间信使，在特定细胞之间传递它们的效应物或信号大分子。

外泌体分离纯化试剂盒提供了一种简单有效的方法，可从细胞培养基中分离和纯化完整的外泌体，可用于电子显微镜分析、NTA分析、WB、qPCR等。该产品含有足够的试剂，可用于处理 400 mL 的细胞培养基。

细胞上清外泌体提取纯化试剂盒使用方法

样品预处理 

1.若是冻存样品，25℃ 水浴解冻后置于冰上备用；若是新鲜样品，直接置于冰上备用。 

2. 取 20 mL 细胞培养上清液，4℃，3,000 g 离心 10 min，收集上清。 

注：若沉淀较多，可对收集到的上清进一步离心，直至无明显沉淀。 

外泌体提取 

1. 每 20 mL 离心上清液中加入 5 mL Exosome Concentration Solution (ECS)。 

注：使用前请充分混匀 Exosome Concentration Solution。 

2. 漩涡振荡混匀 1 min， 4℃ 静置 2 h 以上。注：静置时间越长，外泌体得率越高；但静置时间不可超过 24 h。 

3. 4℃ ，10,000 g 离心 60 min ，弃去上清，保留沉淀。此时沉淀中含外泌体。 

注：此时的沉淀可能不易观察，可在离心前标记沉淀位置。

4. 每 20 mL 细胞培养上清液离心获得的沉淀中加入 0.2 mL 1× PBS，充分重悬后 4℃，12,000 g 离心 2 min，收集上清，即得外泌体粗品。注：若沉淀较多，可对收集到的上清进一步离心，直至无明显沉淀。 

外泌体纯化与保存 

1. 将收集得到的外泌体粗品转移至 Exosome Purification Filter (EPF 柱) 上室中，4℃，3,000 g 离心 10 min，收集 EPF 柱管底液体，即得纯化的外泌体。 

2. 将纯化的外泌体分装后于 -80℃ 保存备用，避免反复冻融。

注意事项及储存

1. 本试剂盒中产品均无 RNase 及 DNase，实验过程应避免引入 RNase 及DNase 污染。 

2. 为了确保获得的外泌体来源于您的细胞，请使用无外泌体的血清对细胞进行培养。 

3. 建议使用新鲜制备的样本，避免反复冻融。 

4. 若后期需要将获得的外泌体与细胞共培养，可用 0.22 μm 滤膜过滤除菌。 

5.室温避光保存2 年。