小鼠肺动脉平滑肌细胞永生化
参考价 | ¥3500.00 |
- 公司名称 上海抚生实业有限公司
- 品牌其他品牌
- 型号
- 所在地上海市
- 厂商性质经销商
- 更新时间2024/4/8 15:29:10
- 访问次数 206
1×106 | 3500.00元 | 15 瓶可售 |
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供货周期 | 现货 | 规格 | 1×106 |
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货号 | A01X1242 | 主要用途 | 仅供科研实验 |
组织来源 | 大鼠的正常肺动脉组织 | 种属来源 | 小鼠 |
小鼠肺动脉平滑肌细胞永生化
一、细胞基本属性
细胞名称 | 小鼠肺动脉平滑肌细胞永生化 |
产品规格 | 1×106 |
商品货号 | A01X1242 |
细胞详述
肺动脉起于右心室,在主动脉之前向左上后方斜行,在主动脉弓下方分为左、右肺动脉,经肺门入肺。由于肺动脉连接着输送静脉血的右心室,所以,肺动脉虽然是动脉,但是它却输送静脉血。血管平滑肌细胞互相连接,形成管状结构;在功能上可以通产生连续收缩,使器官对抗所加负荷而保持原有的形状。该细胞所表达的钙通道表面表达的ICAM-1和VCAM-1,参与血管壁炎症反应。体外培养的肺大动脉平滑肌细胞呈梭形、星形或不规则形。
该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。
注意事项:收到细胞后第一次传代建议1:2传代,充液培养基是维持培养基,不能用来培养细胞。
细胞特性
1) 组织来源于大鼠的正常肺动脉组织。
2) 细胞鉴定:平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光染色为阳性。
3) 经鉴定细胞纯度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
5) 细胞生长方式:长梭状细胞,贴壁培养。
实验步骤:
一、取7-10d雄性SD大鼠,颈椎脱臼处死,浸泡于75%乙醇消毒3-5min。
二、在超净工作台中,将大鼠断头置于玻璃培养皿中,打开颅腔后取出全脑,放在盛有预冷的PBS玻璃培养皿中,去除小脑和间脑。
三、将大脑半球在干滤纸上缓慢滚动以去除软脑膜和脑膜大血管,再放在新的盛有预冷的PBS玻璃培养皿中。
四、用细解剖镊去除大脑白质、残余大血管和软脑膜,保留大脑皮质。
五、大脑皮质放于DMEM中,剪碎成约1mm3大小,放入50ml的离心管中,加入混合酶液I(0.05-0 .1%II型胶原酶,0 .025-0 .05%IV型胶原酶,200-400U DNaseI),混匀后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室温1 000×g离心8min,去上清液。
七、沉淀中加入20%BSA重悬浮,充分混匀,1 000×g,20min,4℃离心,去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1%的胶原酶/分散酶,0.05-0.1%I型胶原酶,100-300U DNaseI )重悬浮,混匀,37℃水浴消化0.5-1h,700×g室温离心6min,去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培养液悬浮混匀,铺于经离心形成连续梯度的12ml 50%Percoll(25 000×g,60min,4℃),1000×g,4℃离心10min。
十、靠近底部的红细胞层之上的白黄色的层面即为纯化的微血管段,吸出后DMEM漂洗两次(离心1000×rpm,6min,室温),去上清液。
加入DMEM培养液(20%FBS,4ug/ml素 )重悬浮,接种于含5%的大鼠 血清37℃孵育过夜所制备的细胞培养皿中,置于37℃、5%CO2培养箱内静置培养24h后更换不含素的混合培养基,随后隔天换液。
原代细胞分离培养的思路:
取材--分离--培养--鉴定
首先将组织从机体中取出,经胰dan白酶/胶原酶处理后分散成单细胞,再在合适的培养基中培养,使细胞繁殖到一定系数后进行细胞鉴定。
公司正在出售的产品:
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Renca小鼠肾癌细胞专用培养基 | AF555标记的细胞角蛋白6单克隆抗体 |
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RGC-5小鼠视网膜神经节细胞专用培养基 | AF555标记的干扰调节因子4结合蛋白抗体 |
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SVEC4-10小鼠淋巴结血管上皮样 细胞专用培养基 | AF555标记的SNRP70蛋白抗体 |
注意事项:
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中,yi酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和技术部沟通;由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,详尽告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。