软琼脂克隆形成服务

软琼脂克隆形成服务实验步骤

1.获取样本，培养细胞，

2.调整细胞悬液密度为1x103个/ml细胞。

3.制备底层琼脂，溶化的5%琼脂和 37℃ 左右预温的新鲜培养液以1:9比例在 40℃ 均匀混合，加入培养皿(直

径 60mm)中，每皿含0.5%琼脂培养基2ml，室温下琼脂凝固。

4.制备上层琼脂 37℃ 密度每川含200个的细胞悬液1.5ml移入小烧杯中，加入 40℃、5%琼脂等体积混匀，即成0.25%半固体琼脂培养基。配好的半固体琼脂培养其立即加入铺有底层琼脂的培养用中，率温下琼脂凝固。37℃，5%CO2静罟培养2-3周。

5.当培养血中出现肉眼可见克降时，终止培养，弃去培养液，PBS液小心浸洗2次，空气干燥，甲醇固定15分钟，弃甲醇空气干燥，用Giemsa染液染色10分钟，流水缓愠洗去边液，空气干燥。

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