免疫荧光染色服务

免疫荧光染色服务一、制片

选无自发性荧光的石英玻片或普通优质玻片，洗净后浸泡于无水乙醇和乙.氧.基.乙.烷等量混合液中。用时取出用绸布擦净。将待检样品如组织块剪成适当大小印压于玻片上。也可采用冰冻切片或石蜡切片样品。

免疫荧光染色服务二、固定

除研究细胞表面抗原或不稳定抗原可不固定外，一般均应固定。

三、水洗

固定后以冷的0.01 Mol/L pH7.4PBS液浸泡冲洗，最后以蒸馏水冲洗，防止自发性荧光。

四、染色

染色分直接染色法与间接染色法。

1. 材料与试剂

(1)荧光抗体，稀释至应用浓度。

(2)0.01 Mol/LpH7.4PBS液

(3)9份优质甘油加1份pH7.4PBS液即为甘油缓冲液。甘油有减少非特异性荧光的作用。

(4)带盖方盘

2.直接染色法

(1)将固定好的玻片置于湿盘中，滴加荧光抗体染色液，以覆盖为度，加盖，37℃感做30min~45min,

(2)PBS冲洗3次，每次冲洗3 min，即3x3冲洗。

(3)蒸馏水冲洗。

(4)滴甘油缓冲液一滴，封片，荧光显微镜检查。

3. 间接染色法

(1)检查抗原:

①取固定标本，加已知的免疫血清，37℃孵育30 min。

②以PBS液3x3冲洗。

③再加荧光标记的抗抗体，37℃孵育30 min。

④PBS 3x3冲洗。

⑤H2O冲洗，凉干。

⑥加甘油缓冲液，封片、镜检。

(2)检查抗体:

①免疫后动物的淋巴组织涂片，自然干燥，甲醇固定。

②滴加相应抗原液(按1:100~1:500稀释)，37℃孵育30 min。

③PBS液3x3冲洗。

④加荧光抗体，37℃孵育30 min。

⑤PBS液3x3冲洗。

⑥水洗，凉干。

⑦加甘油缓冲液，封片、镜检。