YKLINS-1 INS-1大鼠胰岛细胞瘤细胞

INS-1大鼠胰岛细胞瘤细胞

INS-1大鼠胰岛细胞瘤细胞

种属来源:          大鼠

组织来源:          胰岛细胞

特征:          胰岛细胞瘤

细胞形态:          不规则,多角

生长特性:          贴壁生长

培 养 基:          RPMI-1640,90%;FBS,10%。

生长条件:          气相:空气,95%;二氧化碳,5%; 温度:37 ℃,

传代方法:          1:2至1:6,每周2次。

冻存条件:          90% 完全培养基+10% DMSO,液氮储存

支原体检测:        阴性

特点和简介

该细胞源自X射线照射的移植胰岛瘤的大鼠,阳性,可合成原I和II,可用于beta细胞功能研究。

接受后处理

1) 收到细胞后,请检查是否漏液 ,如果漏液,请拍照片发给我们。

2) 请先在显微镜下确认细胞生长 状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

3) 弃去T25瓶中的培养基,添加 6ml本公司附带的完全培养基。

4) 如果细胞密度达80%-90%请及 时进行细胞传代,传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。

5) 接到细胞次日,请检查细胞是 否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。

培养操作

1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。

2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;

1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml YM,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。

2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。