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化工仪器网>产品展厅>试剂标物>生化试剂>其它生化试剂> 反转录试剂盒(一管化去基因组三代酶)

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反转录试剂盒(一管化去基因组三代酶)

参考价 350.00-1300.00
具体成交价以合同协议为准
规格
20T350.00元9999 件 可售
100T1300.00元9999 件 可售

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北京兰博利德商贸有限公司,成立于2007年。 专业从事生命科学方面的服务,为客户提供试剂、耗材、仪器等产品,主要涵盖生物化学、分子生物学、细胞生物学、微生物学、植物学、免疫学、免疫诊断、分子诊断等领域。


我公司有一支具有高度专业化的团队,主要成员都来自于生物消耗品行业的的企业,有多年的从业经验,可以为客户提供标准化、专业化的服务。同时,生物行业的专家为我公司的发展提供战略发展方面的资讯。


兰博利德的企业使命 — 助力生物科研,促进生物科技发展!

 

兰博利德的核心价值— 诚信、共赢、团结、专注!

 

 

 

 

生命科学产品、生化试剂、实验室耗材等

供货周期 现货 规格 20T,100T
货号 F0202

All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix (with dsDNase)

货号F0202

储存条件-20℃

产品组分

规格

All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix

400ul

dsDNase

50ul×2

10×dsDNase Buffer

200ul

Nuclease-Free Water

1ml×2

产品简介

All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix是一款高效、便捷、减少污染的高质量一链cDNA合成试剂盒,包含M-MLV GIII Reverse Transcriptase及其反应Buffer、RNA酶抑制剂、dNTPs, Oligo(dT)20VN和随机引物等一链cDNA合成所需的所有组分,仅需加入RNA模板和水即可开始反应。使用该逆转录试剂盒获得的cDNA,下游可用于qPCR、普通PCR等实验。

本试剂盒采用dsDNase高效去除基因组DNA污染,区别于常规的DNase l, dsDNase 能够特异性的消化双链DNA (dsDNA以及DNA与RNA的杂合链),并且具有热敏感性,可在高温条件下快速不可逆地失活。与传统使用DNase l去除基因组DNA污染的方法相比,dsDNase无需额外加入EDTA进行失活,不仅节省实验时间,而且降低了对逆转录反应的抑制。All-in-OneFirst-Strand Synthesis MasterMix (with dsDNase)作为升级后的一链cDNA合成试剂盒,15分钟内最长可获得12 kb cDNA。

可依据基因组污染严重程度选择采用去基因组DNA污染与反转录分开进行的操作方法,或者去基因组污染与反转录一步法进行的操作方法。

使用方法:

针对基因组含量低的RNA样品(推荐方案)

于冰上配制如下反应体系

试剂

使用量

模板 RNAa

50 ng~1ug

All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix

4ul

dsDNase

1ul

Nuclease-Free Water

To 20ul

a. 推荐采用试剂盒提取的 RNA 作为模板

② 轻柔吸打混匀,瞬离;

③ 37℃温育2min,以去除基因组DNA污染;

④ 55℃温育15 min;

⑤ 反应结束后,85℃温育5 min以终止反应;注:若RNA中基因组DNA污染严重,可适当延长37℃温育时间至5 min。

⑥ 迅速将获得的 cDNA置于冰上,用于后续实验;或立即保存于-20°C。

针对基因组含量高 RNA 样品

1. 基因组 DNA 污染去除

①于冰上配制如下反应体系:

试剂

使用量

模板 RNAa

50 ng~1ug

10x DNase buffer

1ul

dsDNase

1ul

Nuclease-Free Water

To 10ul

a. 推荐采用试剂盒提取的RNA作为模板。

② 轻柔吸打混匀,瞬离;

③ 37°℃温育2 min,以去除基因组DNA污染;

:若RNA中基因组DNA污染严重,可适当延长37℃温育时间至5 min。

④ 65℃温育2 min,使dsDNase失活,冰上放置。

2. First-Strand cDNA合成

于冰上配制如下反应体系

试剂

使用量(实验组)

“实验 1”反应产物

10 μl

All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix

4 μl

Nuclease-Free Water

To 20 μl

② 轻柔吸打混匀,瞬离;

③ 50℃温育15min;

注:若目标RNA不含Poly(A)结构,可预先25℃温育10min。

④ 反应结束后,85℃温育5min,以终止反应;

⑤ 将获得的 cDNA 溶液置于冰上,用于后续实验。

注:cDNA溶液置于-20℃储存,建议不超过1周;置于-80℃可长期储存。

注意事项

预混液中已经包含Oligo(dT)20VN和随机引物,不仅适用于包含Poly(A)结构的真核生物mRNA,也适用于不含Poly(A)结构的原核生物RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板,但不适用于miRNA等小RNA模板。






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