EdU细胞增殖成像分析试剂盒

产品描述
细胞增殖是评价细胞活性、代谢、生理和病理状况的重要指标。EdU (5-Ethynyl-2`- deoxyuridine)是一种胸腺嘧啶核苷类似物，其连有的炔烃基团在天然化合物中很少见，能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶(T)掺入正在复制的DNA分子中，通过基于EdU与荧光染料的特异性共轭反应，把荧光基团标记到新合成的含有EdU的DNA上面，这样可以进行高效快速的检测出DNA复制活性，此技术广泛应用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA损伤修复等方面的研究。
传统的免疫荧光染色(BrdU)检测方法需要DNA变性、抗原修复、抗原抗体过夜孵育等复杂繁琐的操作步骤。而EdU检测方法不需要剧烈的DNA变性，只需温和的细胞固定化和透化处理，能够较好地保护细胞形态、DNA整体结构及细胞内抗原识别位点，操作步骤更加快速、灵敏和准确。EdU与胸腺嘧啶(T)结构非常相似，大小却只有BrdU抗体的1/500，很容易在细胞内扩散；无需抗原抗体反应，能在细胞和组织水平更快速便捷地反映DNA复制活性。
订购信息

产品组分

运输与保存
常温运输。4℃保存，有效期12个月。
使用方法（以24孔板，HK2贴壁细胞为例）
本试剂盒是采用成像检测方法进行检测，适用于荧光显微镜、共聚焦显微镜等仪器。以下方式适用于贴壁细胞；非贴壁细胞可在孵育EdU后进行细胞涂片处理，固定后再采用贴壁细胞的染色流程进行检测。
EdU标记
1.将细胞培养基与EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU标记培养基。
2.提前将2×EdU标记培养基预热，然后将150微升2×EdU标记培养基与等体积细胞培养基混合，获得1×EdU溶液。
【注】：①不建议替换全部培养基，这样可能会影响细胞增殖的速度。②配置好的培养基建议现用现配，用量以没过细胞为宜。
3.孵育细胞2 h，弃培养基。
【注】：①培养时间取决于细胞的增殖速度和生长状态。②大多数肿瘤细胞以及粘附细胞系均可采用2 h的孵育时间。
4.以1xPBS清洗细胞两次，每次5 min, 以除去未掺入DNA的EdU残留。
【注】：对于贴壁不牢的细胞可降低清洗强度。
细胞的固定和通透
1.每孔加入150μL 4%多聚甲醛细胞固定液，室温培养30 min，弃固定液。
2.每孔加入150μL 2mg/ml甘.an.suan，摇床孵育5 min，以中和过量的多聚甲醛。
3.弃甘.an.suan.溶液，每孔加入300μL PBS 洗液，室温清洗5 min。
4.每孔加入 300μL 0.5% Triton X-100 细胞通透液，室温通透10 min，弃细胞通透溶液。
5.每孔加入300μL PBS洗液，室温清洗 5 min。
EdU染色
1.通过用10：1去离子水稀释反应缓冲液，进行配制1×反应缓冲液。
2.按照溶解200 mg缓冲添加剂溶于1 mL 去离子水的比例称取适量的粉末进行溶解，即为可用的缓冲添加剂的浓度，建议现用现配。
【注】：缓冲添加剂为白色粉末，较难准确称量，称量范围可稍微放宽，但是不应超过±20%，且该粉末较易氧化，使用后请旋紧管盖，如试剂出现棕黄色，则需报废或更换。
3.按照以下的表格进行染色反应液的配制：

4.每孔加入100 μL配置好的检测混合液，以覆盖细胞为宜，避光、室温孵育30 min。
5.弃染色反应液，加入300 μL 0.5% Triton X-100细胞渗透液清洗2-3次，每次10 min。
6.弃细胞渗透液，用PBS洗两次，每次 5 min。
DNA染色
1.将Hoechst 33342 *超级纯*（李记货号：AC12L021）用PBS溶液1：1000进行稀释得到1×Hoechst染色液。
2.每孔加入150 μL 1×Hoechst染色液，室温避光孵育20-30 min后，弃染色液。
3.每孔加入300 μL PBS洗细胞两次，去掉洗液。
图像获取及分析
　　建议染色完成后立即进行荧光显微镜拍照观察；如果条件限制，请于4℃条件下避光湿润保存3 d之内完成拍照。若为细胞爬片或涂片，可使用抗荧光淬灭封片剂进行封片后于4℃条件下保存及拍照检测。

注意事项

1. 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
   

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