时间分辨荧光微球(羧基)偶联使用说明书
参考价 | ¥2000-¥4000 |
- 公司名称 山东绿都生物科技有限公司
- 品牌其他品牌
- 型号
- 所在地滨州市
- 厂商性质生产厂家
- 更新时间2022/5/24 9:35:45
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供货周期 | 一周 | 应用领域 | 生物产业 |
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时间分辨微球(羧基)偶联方法
粒径: 100nm-300nm
激发/发射:365/610nm
Ⅰ. 微球的清洗
一般取 1mg 微球(10mg/ml) 标记 0.1mg 抗体,不同项目可进行两边浓度摸索优化。
具体操作流程如下:
1.100ul 微球 + 900 ul 标记缓冲液(50mM MES,pH 6.0,或者0.05MPBS,pH 6.0);
2.17000rpm,离心 20min,第一遍;
3.去掉上清,用 1000ul 标记缓冲液重悬微球;
4.17000rpm,离心 20min,第二遍;
5.去掉上清,用 1000ul 标记缓冲液重悬微球(离心后微球重悬可使用水浴超声仪,建议功率 500-700W,超声时长 2-5min,下同),备用。
Ⅱ. 微球的活化
各称取 20mg NHS 和 EDC,用标记缓冲液溶解,现用现配,即 20mg/ml NHS 和 EDC; 取 20ul NHS,加入到清洗后的微球中,快速混匀;
然后再取 5ul EDC 加入到微球中,快速混匀; 室温孵育,20-30min。
Ⅲ. 清洗去除残留 EDC将活化后的微球:
1.17000rpm,离心 20min,第一遍;
2.去掉上清,用 1000ul 标记缓冲液重悬微球;
3.17000rpm,离心 20min,第二遍;
4.去掉上清,用 1000ul 标记缓冲液重悬微球,备用。
IV. 微球与抗体的偶联
取 0.1mg 抗体溶解于(50mM MES,pH 8.5,或者0.05MPBS,pH 8.5)于 2ml 离心管中,加入活化后的微球,快速混匀后,室温孵育,3 小时。
Ⅴ. 封闭
配制 20mg/ml 的 BSA,即称取 20mg BSA,用终浓度 100mM 乙醇胺溶液充分溶解,备用。
微球标记抗体后,加入 100ul 上述封闭液(含 BSA),室温孵育 1 小时。 Ⅵ. 去除未结合的抗体
此步骤目的是通过高速离心的方法去除游离的未结合微球的抗体;
具体流程如下:
1.17000rpm,离心 20min,第一遍;
2.去掉上清,用 1000ul 稀释液(50mM PBS,pH 7.4 或 50mM Tris,pH 8.0)重悬微球;
3.17000rpm,离心 20min,第二遍;
4.去掉上清,用 1000ul 稀释液重悬微球,即为抗体-微球标记复合物,4℃放置备用, 如长期保存需加入终浓度为 0.2% BSA 和 0.02% NaN3 溶液。
注意事项
1. 保存条件:本产品需要于 2-8℃保存,切勿冷冻;
2. 本产品在使用前确认处于均匀的悬浮状态,有轻微结块可以用超声去除;
3. 本产品活化后建议立即进行偶联实验,活化状态不宜长时间保存;
4. 本产品仅供科研使用。