平行反应监测技术(PRM)

平行反应监测技术(PRM) :

PRM是一种基于高分辨、高精度质谱的离子监视技术，能够对目标蛋白质、目标肽段(如发生翻译后修饰的肽段)进行选择性检测，从而实现对目标蛋白质/肽段进行绝对定量。PRM技术基于Q-Orbitrap为代表的高分辨、高精度质谱平台，首先

利用四级杆质量分析器的选择能力，用Q1选择目标肽段的母离子,随后在Collision cell中对母离子进行碎裂，最后利用

Orbitrap分析器在二级质谱中检测所选择的母离子窗口内的所有碎片信息。这样即可对复杂样本中的目标蛋白质/肽段进行准确地特异性分析。

实验意义:

PRM技术是针对无抗体蛋白的验证新技术，用于label free, iTRAQ, TMT, SILAC等相对定量蛋白质组数据的验证，或对复杂样本中的目标蛋白质进行靶向定量分析。

实验步骤:

用PRM进行蛋白质组数据验证的一般步骤为:

结果展示

实验完成周期及交付标准:

1.实验周期: --般PRM时间为: 5-10天

2.交付标准:

组学验证:

①主要仪器、试剂和实验方法。

②PRM目标离子信息:肽段序列和定量子离子。

③方法学重复性评价:三次技术重复的色谱峰面积相对标准偏差(RSD) (预实验结果) 。

④实验结果:二级图谱，XIC图谱,原始峰面积强度值，矫正后的相对表达量，两组样本间的相对比值，ttest p值。

相对/绝对定量:

①主要仪器、试剂和实验方法。

②PRM目标离子信息:肽段序列和定量子离子。

③方法学评价:相对定量的重复性评价-测试样本的三次技术重复的色谱峰面积相对标准偏差(RSD) (预实验结果) ;

绝对定量的方法学评价-标准品XIC图谱，LOD， LOQ,线性范围， 6个稀释梯度得到的标准曲线及线性公式(每个稀释度有3次技术重复)。

④实验结果:

相对定量:二级图谱，XIC图谱,原始峰面积强度值，矫正后的相对表达量，两组样本间的相对比值，ttest p值。

绝对定量:二级图谱，XIC图谱,原始峰面积强度值，根据标准曲线计算得到的蛋白质浓度值，两组样本间的相对比值，ttest p值。

需确认的信息:

1.样品:

①如果样品为蛋白质溶液，蛋白质总量≥300mg;

②如果是组织样品，样品总量≥0.1g;如果是细胞样品，细胞数量≥107个;

③如果是体液样品，血清≥200ml，脑脊液≥200ml, 尿液≥1ml,泪液≥1ml。

2.样品采集过程中使用到塑料制品时，尽量使用无色进口产品，以减少塑料制品中杂质对质谱检测的影响。

文献参考

[1] Navin Rauniyar. Parallel Reaction Monitoring: A Targeted Experiment Performed Using High Resolution and HighMass Accuracy Mass Spectrometry. IntJ Mol Sci. 2015 Dec; 16(12): 28566- -28581.