A005-96T酶标板法 惠诚生物ABTS自由基清除能力测试试剂盒现货
- 公司名称 上海惠诚生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型号 A005-96T酶标板法
- 产地
- 厂商性质 经销商
- 更新时间 2023/4/28 15:37:27
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供货周期 | 现货 | 规格 | 1kit |
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货号 | A005-96T 酶标板法 | 应用领域 | 医疗卫生,环保,食品,化工,生物产业 |
惠诚生物ABTS自由基清除能力测试试剂盒现货
(A005-96T 酶标板法)
一、 测定原理
采用ABTS(2,2′-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt)评价样品抗氧化能力初由Miller等(1993)提出,现采用的一般是后来Re等(1999)改进后的方法。该方法利用ABTS可被过硫酸钾、过氧化氢、二氧化锰等一系列化合物氧化,生成蓝绿色的ABTS+阳离子自由基,在734nm处有大吸收峰。在抗氧化剂的作用下, ABTS+还原成无色的ABTS。通过测定734nm处的吸光值,即可判定反应物的抗氧化能力。
二、 试剂组成
试剂一:ABTS试剂300μL × 1支
试剂二:液体试剂300μL × 1支
试剂三:1mM Trolox标准溶液 1ml×1支(乙醇配制)
三、 储存条件及有效期
试剂盒-20℃可保存6个月。
四、 试剂的配制
ABTS应用液:将试剂二小心全部转入试剂一管内,旋好管盖,摇匀,室温放置12-16h,得到ABTS浓缩液。取10μLABTS浓缩液,采用稀释液(稀释液先采用纯水20×稀释)稀释至734nm处吸光度为0.65-0.75,记下稀释倍数(通常稀释倍数为50-200倍,可先从80-100倍区间内开始尝试。)将剩余浓缩液按稀释倍数稀释,得到ABTS应用液,避光存放。
Trolox标准溶液:如您需要将样品的ABTS自由基清除能力表示为Trolox当量(TEAC),则需要同步测定Trolox的ABTS清除能力;如您仅需要将结果表示为ABTS自由基清除率,则您可以忽略此步骤(可以不需要用到试剂三)。
惠诚生物ABTS自由基清除能力测试试剂盒现货
五、 操作步骤
空白孔 | 测定孔 | 对照孔1 | |
ABTS应用液(μL) | 200 | 200 | |
样品溶液(μL) | 20 | 20 | |
稀释液(μL)2 | 20 | 200 |
充分混匀,室温避光静置30min3使之充分反应。734nm处采用酶标仪测定吸光值。
1如样品颜色较浅可不做对照管(即认为对照为0);
2稀释液即您配制样品的溶剂,一般为水、乙醇、PBS等;
2建议反应30min,数值更为准确,但一般快速测定时,反应10min即可(参考文献:)。
六、计算公式
1. 简单计算清除率
2. 将清除率表示为Trolox当量(Trolox Equivalent Antioxidant Capacity, TEAC)
先根据计算方法1求出不同浓度Trolox的ABTS自由基清除能力,并作出标准曲线(如下图),再根据计算方法1求出样品的ABTS自由基清除能力,根据标准曲线求出TEAC。
注:1 如未做对照孔,可以将其视作为0;
2 质控孔求值时将其视作测定孔进行计算即可。
七、注意事项
1. 如样品中色素物质不是分析对象,建议先进行脱色处理,处理后样品可不做对照孔;
2. 如不确定样品的ABTS自由基清除能力,可先做不同浓度的稀释液进行摸索,并选择适宜浓度进行测定,高浓度下,浓度与清除率间并不线性相关。Trolox标准曲线绘制建议选取100-1000μM的浓度进行分析;
3. 混匀很重要,建议加样时反复吹打,加样结束后剧烈振摇酶标板30秒以上(液体不能溅出来)。
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