09-250 溴化氢琼脂糖凝胶

为确保产品的性能和无忧的操作，使用前请仔细阅读本手册，有任何疑问请咨询本公司售后技术支持或当地的销售人员（联系方式见附录）。

1.产品介绍

    CNBr Focurose 4FF是经过溴化氰活化后含有氰酸酯基团的快流速纯化介质，适用于偶联蛋白质、多肽、核酸等含有氨基的生物分子。在生物医药纯化工艺中经过反复的验证，得到了广泛的应用。

特点如下：

a.应用广泛，可适用于偶联含氨基的生物类大分子。

b.多点偶联，简单、灵活、快速、有效，能高效的维持生物分子的生物学活性及稳定性。

c.流速快、产率高、易于放大。

表1：介质性能参数

2.偶联条件

a.（A液）清洗

取适量的沉降胶（0.83g清洗完成后约为1.0ml），用5倍体积的A液将介质重悬，5min后将溶液抽干。重复此步骤5次。

备注：此步骤用于激活介质，要保证A液的清洗体积要充足、清洗时间固定在0.5h左右（时间太久介质上面的基团会水解）。

b.配基溶液的制备

将要偶联的生物分子用B液溶解或者将生物分子置换到B液中（生物分子浓度为1-10mg/ml,建议为5mg/ml）。

备注：确保偶联时的pH和盐浓度与B液一致。

c.偶联

将清洗完的介质和准备好的样品按等比例（体积比）混合，室温条件下温和混匀3-4h。确定偶联成功（通过测定偶联前后生物分子含量确定偶联效率）后，将溶液抽干。

备注：偶联建议在室温条件下偶联3-4h。对于不稳定的配基，建议4-8℃偶联过夜。

d.（C液）清洗

用5倍体积的C液将偶联后的介质重悬，再将溶液抽干。再重复此步骤3次。

备注：此步骤用于清洗介质中残留的生物分子，清洗要*。

e.封闭

用5倍体积的C液进行重悬，室温条件下温和混匀3-4小时后，将溶液抽干。

备注：此步骤用于封闭介质上面的基团，室温条件下温和混匀3-4小时即可。

f.（D液和E液）清洗

用5倍体积的D液将封闭后的介质重悬，5min后将溶液抽干；再用5倍体积的E液将介质重悬，5min后将溶液抽干。重复此步骤3次。

备注：此步骤用于酸碱清洗掉偶联不够紧密的生物分子。

g.保存

用5倍体积的纯化水将介质重悬后抽干，再用5倍体积的20%乙醇将介质重悬后抽干，最后用20%乙醇浸泡保存。

备注：此步骤用于保存介质，避免微生物生长。

h.溶液配制

A液：0.001MHCl、0.5M NaCl，调节pH 3.0，4-8℃保存（A液使用前要进行预冷处理）。

B液：0.2M NaHCO3、0.5 M NaCl，调节pH 8.3（如果要偶联的生物分子为IgG时，pH=8.5-9.0），室温保存。

C液：0.1M Tris-HCl，调节pH 8.3，室温保存。

D液：0.05M Tris-HCl、0.5M NaCl，调节pH 8.5，室温保存。

E液：O.05M 甘氨酸、0.5MNaCl，调节pH 3.5，室温保存。

F液：1.0M NaCl，室温保存。

3.清洗

    清洗后可以去除一些强结合性物质（例如一些强结合的蛋白、变性蛋白、脂类等），从而达到恢复介质的优良性能（例如载量、流动性、柱效等）。

    建议每使用5次后进行一次清洗，具体清洗频率需根据纯化的初始样品的洁净度进行调整。

⑴常规清洗

a.用5-10倍柱体积的纯化水冲洗。

b.用5-10倍柱体积的D液冲洗。

c.用5-10倍柱体积的E液冲洗。

d.用5-10倍柱体积的F液冲洗。

e.用5-10倍柱体积的纯化水冲洗。

f.用5-10倍柱体积的20%乙醇冲洗后保存。

⑵剧烈清洗

a.用2-5倍柱体积0.2%非离子型去污剂冲洗后，立即用5-10倍柱体积纯化水冲洗。

b.用2-5倍柱体积6M盐酸胍冲洗后，立即用5-10倍柱体积纯化水冲洗。

c.用5-10倍柱体积的20%乙醇冲洗后保存。

备注：剧烈清洗条件是否适用主要取决于偶联的生物分子的稳定性，采用此条件清洗前，建议先做一个小规模的预实验验证生物分子的稳定性。

4.应用案例

案例一

案例二

5.常见问题

表2：常见问题及解决方案

6.订购信息

表3：订购信息表

备注：大规格包装产品或其它产品购买，请咨询本公司当地销售或售前技术支持。