背景知识

酶联免疫斑点检测（Enzyme-Linked Immunospot Assay，ELISPOT）可以分解成“酶联免疫"和“斑点"两部分。“酶联免疫"与ELISA中的含义相同，都是指基于酶促放大反应的免疫学检测。与ELISA一样，ELISPOT的抗体也是包被于固体载体上，所不同的是：ELISA抗体捕获的抗原来自样品溶液中已经存在的、均匀分布的抗原分子，而ELISAPOT抗体捕获的抗原来自样品细胞在检测当时新鲜分泌的抗原分子；ELISA显示出来的是或深或浅的有色溶液，而ELISAPOT显示出来的是沉积在固体基板上或多或少的有色斑点。

随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用, 使体外检测各种细胞因子及抗体研究有了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法（ELISA）检测体液中游离的细胞因子（CK）或抗体，但由于游离的循环抗体或 CK 的半哀期不同，使之在体液中不断的被代谢或与靶器官结合，而不能确切的反映体内的抗体及CK 的水平。80 年代，国外的科研工作者根据 ELISA 技术的基本原理，建立了体外检测特异性抗体分泌细胞和 CK 分泌细胞的固相酶联免疫斑点技术（ELISPOT）。因其具有较高的特异性和敏感性，目前正被国内外广泛应用，对探索自身免疫系统疾病发病机制具有重要意义。

应用范围：

德国BIOSYS公司产品，该EliSpot Reader是针对35-100mm培养碟、载片、6-384孔多孔板和微量培养板的自动检测和分析仪器。适用于目前实验室常用的各种培养板上酶联斑点(Elispot)、病毒斑（ Viral Plaque）、克隆形成（CFU）、肿瘤细胞集落形成（HTCFA）,干细胞集落形成试验等实验结果的分析。

Elispot，SARS COV2测定，抗病毒，药物，氟虫，细胞/活/死/凋亡细胞，转染，MCMV和HCMV测定，HEK 293测定，FOCI测定，中和测定，马立克氏病病毒，类器官，转基因测定，菌落的细胞感染测定 计数，抗生素效力，腺病毒。

For Elispot, SARS COV2 Assay, cell infection assay antiviral, drug, flourospot, live/dead/apoptotic cell, transfection, MCMV and HCMV assay, HEK 293 assay, FOCI assay, neutralisation assay, Marek's disease virus, organoids, transgene assay, colony counting, antibiotic potency, adenovirus

德国biosys公司介绍

德国biosys由化学家兼工程师Werner Freber创建于1986年，专注于 EliSpot酶联免疫斑点计数和定量自动化检测分析设备30多年，biosys公司的立体3D双光照明（增强斑点与背景的对比度，有效抑制板孔侧壁反光造成的“幻影现象”，提高检测度），能进行单斑点、每孔光密度测定以定量细胞因子分泌的照明系统，解决了ELISPOT斑点计数的快速化，标准化和斑点信息的详细化，并且可以对细胞因子进行定量分析，是能进行单斑点、每孔光密度测定以定量细胞因子分泌的照明系统，获得应用于ELISPOT斑点识别的3D双光源技术，*实现对ELISPOT膜板和ELISPOT透明板的良好识别，采用改进机械结构的前置式载物台和自动开关密闭检测室，同一孔中同时识别多至12色ELISPOT斑点，*实现荧光ELISPOT检测，欧盟科技项目：Eureka Project 2956（多种细胞因子分析仪）仪器。

biosys的bioreader（bioreader 7000系列）和 biocount（biocount6000系列）已成为Elispot酶联免疫斑点检测分析的金标准。

ELISPOT技术解决方案提供商。biosys 的产品包括 ELISPOT 分析仪硬件、分析软件、试剂和标准样等。CTL拥有自己的，符合GLP规范的高通量ELISPOT实验室，是世界上能提供全套 ELISPOT 服务，包括 ELISPOT 的质量控制、标准化、临床应用和技术服务、E L I S P O T技术培训和承担来自N I H和F D A等部门重大基金的综合性技术服务提供商。

Biosys酶联免疫斑点图像计数和分析产品特点：

●立体3D双光照明系统：

能进行单斑点、每孔光密度测定以定量细胞因子分泌的照明系统。
● 彩色成像及分析系统：

高分辨率2340×2000 分辨率SONY fire wire真彩数码成像系统，可进行双色或三色Elispot实验结果的检测。也适用于病毒斑(Viral Plaque)、克隆形成(CFU)、肿瘤细胞集落形成（HTCFA）,干细胞集落形成试验等。  数据量高达5M 的图像数据（单孔）﹑双色以上的图像分析功能, 一体化HP 20’ 液晶显示器.
● 高精度X－Y定位载板台：

采用高精度齿轮步进电机，避免了皮带轮步进电机的打滑和老化，定位精度<0.01mm。

  高精度微步进电机、齿轮传动方式、样品架移动精度< 0.01mm
● 通用性强：

适用各种载玻片、35-100mm培养碟、6 / 12 / 24 / 48 / 96/384孔各型培养板和滴定板。对于实验室常用的U-Cytech公司、 Mabtech公司、 R&D公司、 Diaclone公司、 Millipore公司、Whatman公司、 Nunc公司等各型实验室常用ELISPOT KIT（透明板、白色板、PVDF和尼龙膜板）、Greiner等公司的透明培养板、不透明（白色）培养板、以及PVDF膜培养板均适用，检测Elispot斑点同时可以分析肿瘤细胞的集落、克隆斑、病毒斑的识别。
您可以从任何来源和细胞系（无论是人还是动物）中选择Elispot分析。

● 自动聚焦：

需进行不同类型培养板的检测时，无须手动调焦，转换更为方便。
●高灵敏性，高特异性的优点：

动态“像素周围识别”，模糊、弥散、过大、过小斑点以及高背景或不规则背景均可检测。

“自动边缘识别技术”,“动态背景识别” Bioreader不是采用一个固定的背景平均“洗去”值，对不规则背景有很大意义。
Bioreader自动识别和去除纤维, 还可以调节图像参数, 不同程度“洗去”背景，让背景和斑点颜色对比。
●高分辨率：

每孔可检测多至2000个斑点，直径>3µm 的斑点即可被有效检测（通常设定检测的斑点大小为20-50µm）。

所有Bioreader型号均配备5 MPixel相机，Bioreader-F-z-i可使用集成的显微变焦镜头提供多达200倍的放大倍率。如果用户需要更多印版格式并正在寻找便宜的变焦效果，则可选更多像素的相机，可以升级光学组件和摄像头
●边沿识别系统：

尤其针对透明板、白色PVDF板，可有效识别板孔边缘，保证整个板孔的计数。
●光密度值测定：

应用ELISA透光测量原理，可对每个斑点，每个孔进行光密度值测定，定量分析细胞因子分泌。
●*的WASH OUT背景补偿功能：

对于背景重的培养板孔可进行自动背景补偿调节。
●测量结果可信：

已经过MABTECH, U-Cytech, Diaclone, Pharmingen, R&D等公司ELISPOT产品的验证，测量结果可信度高。
●用户自定义参数和再分析：

用户可根据试验情况设置斑点识别参数，直接重新分析已扫描数据，不必重复扫描。相同参数下分析结果可重复性为+/-*。
●“One－Click”测量区域选择：

直观的板孔选择界面，可轻松进行单孔、任意孔区域、全板扫描。
●智控分析方式：

用户可手动选择需去除的斑点，自定义需去除的破损区域或无法识别区域，测量结果更可信。
●数据分析全面：

包括培养孔原始数据如每孔斑点数、斑点几何形状（直径、圆度、曲率、毛糙度）参数、每个斑点坐标、光密度（提示细胞因子量）等以及样本均数、方差、统计学分布等多种统计数据和分析图表。
●直接输出模式：

可将整板图像，单孔图像，每孔斑点数，斑点详细数据、分布、和统计学分析结果直接输出到Word、Excel、Powerpoint。可选择HTML, BMP, JPEG, PDF等多种格式。
●检测快速：超高精度扫描每个培养板约需12-15分钟；快速扫描每个培养板约需6-8分钟 。
● 欧盟CE认证、符合21 CFR PART 11认证要求

●软件方面
预设试验分析模式、方便使用；分析参数开放、人机互动更可靠
Bioreader预先设置30多种针对各种板型的分析方法，分析参数开放，用户还可自定义分析方法，人机互动可分析各种不同情况的Elispot实验板结果。

●历史悠久，产品成熟度高、文献量大：

30多年历史验证，1500多个实验室成功使用，国内有50多的单位成功使用，无技术和应用风险。

相机和光学分辨率

在多孔板上，Bioreader®7000 Fzi micro的大分辨率是多少？

单细胞> 3 µ，聚焦点10-2000 µ或噬菌斑100-5000 µ，细胞克隆50-2000 µ或更多。

BIOSYS使用“真实”光学放大倍数来实现此分辨率

 德国Biosys酶联免疫斑点图像计数 总代理

德国Biosys酶联免疫斑点图像计数 总代理

Bioreader5000的性能及特点简介

荧光Elispot
Bioreader 5000系列可以检测荧光Elispot斑点
Biorader 5000是Elipsot领域商业化能检测荧光Elipsot斑点的仪器.
这也是Elipsot领域同时检测3种以上细胞因子的新的应用仪器

图像处理方面 五大*图像技术，分辨率更高、斑点图像更清晰、结果

产品特点：

l       专业的外观设计

l       一体化HP 20’ 液晶显示器

l       3D立体图像照明系统

l       前置载物台、密闭式检测室

l       真彩2340×2000 分辨率的索尼公司火线（Firewire）数码摄像系统

l       数据量高达5M 的图像数据（单孔）﹑双色以上的图像分析功能

l       高精度微步进电机、齿轮传动方式、样品架移动精度< 0.01mm

l       五大*图像技术，分辨率更高、斑点图像更清晰、结果

l       预设试验分析模式、方便使用；分析参数开放、人机互动更可靠

l       快速检测：2-3 分钟完成96孔板的检测

l       简洁的软件操作界面，规范的文件管理

l       适用6/12/24/96 孔任何品牌/类型的微孔板

l       适用ELISPOT/病毒斑/肿瘤细胞的集落/单克隆抗体的细胞克隆

l       软件设计符合美国FDA 21 CFR PART 11

l       符合欧盟CE 标准

l       欧盟科技项目：Eureka Project 2956 (多种细胞因子分析仪)