明胶酶谱MMP（2/9）检测实验

明胶酶谱MMP（2/9）检测实验

酶谱法(Zymography) 基于SDS- PAGE电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法检测MMP-2、MMP-9活性，灵敏度可达10pg，高于ELISA 方法。

基本原理和程序是:以加有胶原酶底物的SDS-PAGE凝胶分离含蛋白酶的样品，电泳结束后取出凝胶与酶反应Bufer孵育,凝胶染色与脱色。凝胶中由于含底物蛋白而被深染,形成深色背景，但在有蛋白酶条带的位置，蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮区域，能同时指示MMP-2、MMP-9的位置(酶谱)，可检测样本有血液、渗出液、细胞提取物等。

服务周期: 10工作日

结果提供:结果报告、代表性图片，操作流程及相关试剂仪器信息。

明胶酶谱MMP（2/9）检测实验样本提供需知:

1)客户告知实验分组、编号及背景设计资料，具体要求请事先说明;

2)标本收集、保存与运送:

①组织样品:新鲜组织放入液氮或-70 度保存,组织不少于100mg;

②培养细胞:通过细胞计数取不少于2x106个细胞于EP管,加入0.5ml生理盐水，混匀后保存于冰箱(-70°C，避免反复冻融) ;

③血液细胞标本:以抗凝管保存血样或以淋巴细胞分离液分离细胞后加入0.5ml生理盐水，保存(-70°C可长期保存，避免反复冻融)

④血清或细胞培养液标本:离心去掉杂质后取上清入EP管,保存(49C可保存15-20 天, -70°C可长期保存，避免反复冻融)

4)样本运输:

①组织样本、细胞样本以干冰运输;

②细胞样本也可直接寄送培养瓶(密封保证不污染、培养液不漏出) ;

③血清或上清液直接加冰袋寄(送视路程远近2 3天可到达)。

客户须知:

检测系统含阳性参照或内参，报价含蛋白提取

 实验注意事项：

1.制备聚丙烯酰胺时应注意排除气泡 。

2.明胶酶谱的活性受钙离子，锌离子，和PH值等因素的影响，因此缓冲液 配制应严格准确，尽量用超纯水，孵育温度也掌握好。

3.用大梳子

4.孵育液的PH在7.5-7.6，复性的TRITON时间长了会有絮状物，所以实验时尽量使用新鲜配置的。

5.孵育的37度不要在CO2培养箱中，因为会改变孵育液的PH值，在普通孵箱即可。

6.明胶要4度保存，配好后1周内使用

实验代做服务：