线粒体膜电位

       一、服务介绍

　　大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位（MMP）的下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中早发生的事件之一。它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前,一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。

　　二、实验原理

　　JC-1是一种碳氰化合物类阳离子荧光染料，可作为检测线粒体跨膜电位指示剂。JC-1在细胞内以聚合体和单体两种不同的物理形式存在，分别处于不同的荧光发射峰。当JC-1浓度低或膜电位水平低时，主要以单体形式存在，激发波长为527nm，呈绿色荧光；当JC-1浓度升高或线粒体膜电位水平较高时，形成聚合物，发出红色的荧光，激发波长为590nm。当细胞发生凋亡时，线粒体跨膜电位被去极化，JC-1从线粒体内释放，红光强度减弱，以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光，根椐这一特征就可以检测线粒体膜电位的变化。

　　三、实验流程

　　1.细胞培养；

　　2.用适当的方法诱导细胞凋亡，同时设立阴性依照组合阳性对照组，收集细胞；

　　3.用PBS洗涤细胞三次，收集不多于1×106的细胞；

　　4.取100μL10×IncubationBuffer加900μL灭菌去离子水稀释成1×IncubationBuffer，混匀并预热至37℃；

　　5.吸取500μL1×IncubationBuffer，加入1μLJC-1，涡旋混匀配成JC-1工作液；

　　6.取500μLJC-1工作液将细胞均匀悬浮，37℃，5%CO2的培养箱中孵育15~20min。

　　7.室温离心（2000rpm,5min）收集细胞，用1×IncubationBuffer洗两次；

　　8.吸取500μL10×IncubationBuffer重新悬浮细胞；

　　9.流式细胞仪检测，分析。

　　四、客户提供

　　细胞株(冻存株或培养好的细胞)，相关药品或MMP检测试剂盒（可代购）!

　　五、公司提供

　　实验步骤、结果图、数据结果和分析报告

　　实验周期：1-2周，具体需要根据细胞生长情况及实验内容而定。