SILAC-细胞差异蛋白质组分析服务

一、SILAC-细胞差异蛋白质组分析服务简介

SILAC（Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture）是基于哺乳动物细胞生长对“必需氨基酸”的依赖原理，将稳定同位素（13C、15N）标记的Lys（K）和Arg（R）加入细胞培养基中对细胞进行培养。在细胞的增殖过程中，稳定同位素标记的K和R自然“掺入”到蛋白质中，从而在细胞中所有的蛋白质上引入了质量标签（Mass Tag，3-10Da）。借助后续MS的高分辨率，在MS层面上，实现对蛋白质水平进行高精度定量的技术。

SILAC技术基本的应用是做细胞/细胞亚组分（细胞质、细胞核、线粒体、外泌体等）的各种蛋白质表达差异谱分析。此外，（1）使用SILAC技术标记小鼠、酵母、大肠杆菌、果蝇、线虫等模式生物，从而可以借助MS直接定量比较动物个体的蛋白质组差异（SILAM）；（2）利用SILAC技术，借助细胞株，通用可以分析人体的不同组织的蛋白质表达谱差异（super-SILAC）；（3）SILAC结合IP-MS（免疫沉淀-质谱）可定量分析蛋白质互作/翻译后修饰的定量分析（SILAC+IP-MS）。

SILAC技术的优势体现在（1）直接通过细胞代谢，实现对整个细胞蛋白质组的标记，从实验的源头引入质量标签（Mass tag），实验的系统误差显著降低；（2）实验步骤简单，只要将SILAC标记的和非标记的蛋白质1:1混合，就能进行后续MS分析；（3）定量准确度更高，定量信息丰富。

二、SILAC-细胞差异蛋白质组分析服务服务方案

（一）整体服务：

只需客户提供细胞即可，我方负责完成：

SILAC培养基制备。

细胞SILAC标记及标记效率MS检测；

SILAC标记细胞与非标记细胞扩增；

蛋白质提取、分离（SDS-PAGE）及染色；

切割条带，分别进行LC-MS测试；

MS数据分析，完成蛋白质的鉴定及定量分析，筛选差异表达蛋白；

差异表达蛋白常规生物信息学分析；

我方同样有技术实力进行具体蛋白质（经用SILAC实验筛选、验证后的蛋白）的功能实验。如有需求，方案另议。

（二）合作共赢方案：

原则是通过协商签订合同，双方各完成一部分实验内容。

客户方需从我方购买相应的SILAC培养基及耗材。我方提供细胞SILAC标记的实验方案，协助客户完成细胞的SILAC标记过程。

标记完成后，需用LC-MS鉴定细胞标记效率。该步骤需交由我方完成鉴定。

正式实验的蛋白质样品，需交由我方完成MS鉴定和定量分析。

三、其他特色：

SILAC培养基。我方能生产多种类型的SILAC培养基（K6R6、K4R6、K6R8、K8R10等），7-10个工作日发货，免去客户从国外进口SILAC培养基及其标记氨基酸的漫长货期。

SILAC培养基，500ml起订。

我方同时销售SILAC相关的试剂/耗材（dialyzed FBS，filter等），欢迎咨询。

四、客户发表的代表性论文：

Analytical chemistry 2017, 89(19):10248-10255. 

Analytical chemistry 2017, 89(21):11468-11475.

Journal of proteome research 2013, 12(5):2055-2066.

Amino acids 2014, 46(4):841-852.