抗荧光衰退封片剂CITIFLUOR™

抗荧光衰退封片剂CITIFLUOR™ -（Antifadent Mountant Solutions）

一系列特意为免疫荧光反应封片设计的产品，*的配方使得染料的荧光不再衰退。常用的抗荧光衰退封片剂有AF1、AF2、AF3、AF4、AF87、AF100、AF200、AF300、CFM-1、CFM-2等等。其中部分产品含DAPI,可衬染细胞核或衬染DNA的实验。

关于抗荧光淬灭剂，常见的三种：酚型的没食子酸丙酯n-Propyl gallate (NPG)、胺型的对苯二胺p-Phenylenediamine (PPD)、胺型的 1,4-Diazabicyclo-octane（DABCO）三乙烯二胺。荧光淬灭的基本理论是这样滴：组织切片中的普通溶解氧在激发态时变成了单线态氧，单线态氧类似氧自由基，这个东西就是荧光淬灭的主要元凶，我们加入的抗淬灭剂主要是与这个元凶反应，直接清除单线态氧。注意，封片剂中加入抗淬灭剂，往往在激发的初级阶段使荧光总量降低，还有与DNA结合染料反应的风险。看看这三种试剂的优缺点吧：PPD可以与花菁染料反应（尤其Cy2），故这类染料封片考虑不用含PPD的封片剂；NPG，无毒，活细胞荧光染色这类封片剂，但是NPG对细胞凋亡的过程有所干涉，进行此类研究的同学多注意啦，尽量避开含有NPG的封片剂；DABCO不像PPD那样有效且毒性低，可以用于活细胞，但是与NPG一样，对细胞凋亡的过程有所干涉。

大量的封片剂堆砌在这里，怎样快速的找到自己需要的那个呢？简单的思路是：

*步，凝固型还是非凝固型？凝固起来贮存和拿取很方便，要考虑的是凝固过程中组织片的收缩以及需要脱水步骤的收缩。非凝固型需要考虑的是封片剂的挥发和侧漏，当然需要盖玻片啦（有时还需要硅胶密封垫spacer），而且往往盖玻片还需要密封起来，常用指甲油、牙科蜡、VALAP (equal mixture of Vaseline, lanolin, and paraffin mixed on a heating plate 60°C)在盖玻片周围涂一下，指甲油干固所需时间较长，有污染镜头的风险；牙科蜡在常温拿下能较快固化；VALAP (equal mixture of Vaseline, lanolin, and paraffin mixed on a heating plate 60°C)在活细胞封固中很常用。

第二步：需要甘油基（水溶性）的还是非甘油基（脂溶性）的？甘油可以与任何比例的水混溶，可以与乙醇相溶，但不与油混溶。知道这些，选择起来就简单多了。你的组化反应体系是怎样的？含水，就选甘油基（水溶性的）的。经过严格脱水处理，就选非甘油基的（油溶性的）。

第三步、封片剂的折射率。染色的片子用封片剂选择折射率在1．52至1．54之间透明度佳；未染色组织用有很高或很低折光率的封片剂封固，这样的封片剂可以消除球面相差，获得佳的图像。

介绍用到的成膜剂：

聚乙.烯醇poly (vinyl alcohol)：有机高分子物质，无毒，可溶于水，常用的一种成膜剂。根据其聚合度和醇解度的不同编为不同的号码，例如Mowiol® 4-88。PVA也可以加入其他物质或者反应进行改性处理， 例如Permafix-1就是改性的PVA。

聚乙烯吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone)简称PVP，是一种非离子型高分子化合物，也是常用的成膜剂。

产品选购指南：

l AF1:基本成分是甘油、PBS缓冲液、抗荧光淬灭剂、其它成分等，折射率1.46，PH10左右，适于用于检测浸泡在甘油中的组织切片、死细胞、 FISH (including CARD-FISH)等的封片。

l AF2:基本成分是甘油、抗荧光淬灭剂、其它成分等，没有自身的缓冲液。折射率1.47，该产品的优势在没有自身缓冲液，可以与任意其它缓冲液相容。

l AF3:基本成分是PBS缓冲液、抗荧光淬灭剂、其它成分，折射率1.34，对于活细胞检测特别适用。

l AFR3: 基本成分是PBS缓冲液、一种型的抗荧光淬灭剂（非胺非酚型）、其他成分等。

l AF4:又称Glycerol/n-propyl gallate mounting medium封片剂，添加的抗荧光衰退剂是没食子酸丙酯n-Propyl gallate (NPG)。

l AF87：特别的地方是含有无荧光浸油，这是为在高倍镜下观察特别设计的封片剂，对于DAPI染色特别有用（DAPI 在甘油基封片剂中有疏散的倾向）。

l AF100:基本成分是PBS缓冲液、抗荧光衰退剂、其他成分等，这是一款不含甘油的封片剂，需要与CFPVOH溶液配套使用。需要预先混合AF100和CFPVOH溶液，用多少混合多少，混合后10小时内用完。该封片剂的折射率1.34-1.35.

l AF200:与AF100类同，不同的是，AF200是甘油基的,胺基型抗荧光衰退剂，适于花青素、Alexa、Hoeches等封片。

l AF300:与AF100类同，不同的是，AF300是甘油基的，酚基型抗荧光衰退剂。

l CFM系列的封片剂的折射率均是1.52，等于或者近似等于所用载片和盖片玻璃的折射率，这对图像的获得很有帮助。主要于激光共聚焦显微镜下使用，或者高倍镜需要浸油的情况下来替代浸油。CFM-1的pH约6.5，.CFM-1 Plus Antifadent的PH值大约10， CFM-2的pH of约~8.5，CFM-3的PH值接近中性。

订购信息：

抗荧光衰退封片剂CITIFLUOR™