深芬仪器非洲猪瘟检测仪

^{_{深芬仪器非洲猪瘟检测仪使用说明书}}

^{_{l 本试剂盒用于检测血清非洲猪瘟（ASF）存在与否。}}

^{_{l 有效期：6个月}}

^{_{l 保存条件：2-8℃}}

^{_{l 本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床诊断}}

^{_{检测前准备工作：}}

^{_{1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。}}

^{_{2. 从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象；放置室温，轻摇均匀，待结晶*溶解后再配置洗涤液。可将20ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释配置成400ml工作浓度的洗涤液，未用完的放回4℃}}

^{_{3. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。}}

^{_{实验所需自备试验器材：}}

^{_{1. 检测仪（450nm）}}

^{_{2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL}}

^{_{3. 37℃恒温箱或水浴锅}}

^{_{4. 蒸馏水或去离子水}}

^{_{试剂盒组成：}}

^_备注：

^{_{1.（96T/48T）打开包装后请及时检查所有物品是否齐全。}}

^{_{实验原理：}}

  ^{_{试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被非洲猪瘟抗体的包被微孔中，依次加入标本、HRP标记的检测抗原，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），与CUT OFF值相比较，从而判定标本中非洲猪瘟（ASF）的存在与否。}}

^{_{样本处理及要求：}}

^{_{1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。}}

^{_{2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。}}

^{_{3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。}}

^{_{4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。}}

^{_{6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.}}

^{_{7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。}}

^{_{注意事项：}}

^{_{1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。}}

^{_{2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。}}

^{_{3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。}}

^{_{4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。}}

^{_{5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。}}

^{_{6. 在储存和温育时避免强光直接照射。}}

^{_{7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。}}

^{_{8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。}}

^{_{9. 不能使用过期产品,不同批号组分不得混用。}}

^{_{10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。}}

^{_{操作步骤：}}

^{_{1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。}}

^{_{2.  设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL；}}

^{_{3.  待测样本孔加待测样本10μL，样本稀释液40μL；}}

^{_{4.  随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗原100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。}}

^{_{5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。}}

^{_{6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光水浴锅孵育15min。}}

^{_{7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。}}

^_计算：

^{_{1.  试验有效性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；}}

      ^{_{阴性对照孔OD值平均值≤0.15。}}

^{_{2.  临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15}}

^{_{3.  阴性判断：样品OD值＜临界值（Cut off），样品为阴性}}

^{_{4.  阳性判断：样品OD值＞临界值（Cut off），样品为阳性}}

^{_{深芬仪器非洲猪瘟检测仪试剂盒性能：}}

^{_{1.  准确性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；阴性对照孔OD值平均值≤0.15，说明试验结果有效。}}

^{_{2.  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。}}

^{_{3.  重复性：板内、板间变异系数均小于15%。}}

^{_{4.  贮藏：2-8℃，避光防潮保存。}}