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化工仪器网>产品展厅>试剂标物>行业专用试剂>临床医学检验用试剂>YS300201 小反刍兽疫病毒实时荧光PCR试剂盒

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YS300201 小反刍兽疫病毒实时荧光PCR试剂盒

参考价 ¥ 3200
订货量 ≥1
具体成交价以合同协议为准

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我公司主营如下:
   免疫组化试剂盒,Elisa试剂盒:大鼠Elisa试剂盒,小鼠Elisa试剂盒,人Elisa试剂盒,犬Elisa试剂盒,鱼Elisa试剂盒,鸡Elisa试剂盒,牛Elisa试剂盒、其他动物类Elisa试剂盒、植物Elisa试剂盒、分子生物学试剂盒、 免疫组化试剂盒、金标检测试剂盒、生化试剂盒、细胞凋亡试剂盒。
    抗体:一抗、二抗、进口原装抗体、进口分装抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、单标抗体、双标抗体、多标抗体;免疫组化抗体、免疫细胞化学抗体、免疫荧光抗体、流式细胞抗体。抗体:一抗、二抗、进口原装抗体、进口分装抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、单标抗体、双标抗体、多标抗体;免疫组化抗体、免疫细胞化学抗体、免疫荧光抗体、流式细胞抗体。
    动物血清:内皮细胞专用血清、GIBCO胎牛清、HyClone。动物血清:内皮细胞专用血清、GIBCO胎牛清、HyClone。
    细胞:*细胞、正常细胞、肿瘤细胞、肿瘤耐药细胞。细胞:*细胞、正常细胞、肿瘤细胞、肿瘤耐药细胞。
    欢迎新老客户前来咨询订购,我们将竭诚为您服务。


免疫组化试剂盒,ELISA试剂盒,PCR试剂盒,发光法微量法试剂盒等

供货周期 一周 规格 50T
货号 YS300201 主要用途 定性检测病毒,对病毒引起的疾病诊断及疗效评估有重要指导意义。

欢迎新老客户咨询索取改产品详细说明书及规格价格

【产品名称】

通用名称:小反刍兽疫病毒实时荧光PCR试剂盒

英文名称:s Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包装规格】 50T/盒

【预期用途】

本试剂盒利用实时荧光PCR原理,定性检测病毒,对病毒引起的疾病诊断及疗效评估有重要指导意义。

【检验原理】

本试剂盒针对病毒的高度保守区域设计特异性引物和探针,在反应体系中含病毒基因组模板的情况下,PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用荧光定量PCR仪对PCR过程中相应通道信号进行实时监测和输出,实现检测结果的定性分析。

【主要组成成份】小反刍兽疫病毒实时荧光PCR试剂盒

序号

组成

25T/盒

50T/盒

1

RT-PCR反应液

375 μL×1管

750 μL×1管

2

  逆转录酶

 50 μL×1管

100 μL×1管

3

   Taq酶

 75 μL×1管

150 μL×1管

4

  阳性对照

 40 μL×1管

 40 μL×1管

5

  阴性对照

 40 μL×1管

 40 μL×1管

6

说明书

1份

1份

注:阴性对照为基因组DNA,阳性对照为失去活性的病毒cDNA。

【储存条件及有效期】避光-20℃以下保存,避免反复冻融,有效期12个月。

【适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。

【样本要求】

1. 适用标本类型:发病动物血液、空肠及小肠肠内容物及组织脏器(肠道组织、肠系膜及淋巴结等)和病毒培养液。

2. 标本采集,方法如下:

(1) 血清:用一次性注射器取静脉血2-3ml,转至5ml 的干燥管中,密闭送检。

(2) 肠内容物:无菌条件下取肠道内容物约1g 左右,置入1ml 含有1.0ml PBS(或生理盐水)的5ml 离心管中,立即送检。

(3) 组织脏器:取发病动物肠道组织及肠系膜淋巴结等组织约1g,置一1.5ml的洁净离心管中,密闭送检。

3.应避免标本间交叉污染。

4.标本收集后可立即检测;若不能立即检测,可置于2~8℃冷藏过夜保存;如需长期保存,标本应冻存于-80℃以下,避免反复冻融。

【检验方法】小反刍兽疫病毒实时荧光PCR试剂盒

1. 试剂准备(试剂准备区)

(1)从冰箱中取出试剂盒, 从试剂盒中取出实验所需试剂,充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。

(2)核算当次实验所需要的反应数(n),并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。

n =阴性对照数(1T)+阳性对照数(1T)+误差预留量(1T)+样本数

单反液配制表(每份)

RT-PCR反应液

15.0 μL

逆转录酶

 2.0 μL

Taq酶

 3.0 μL

 (3)在无菌离心管中加入上述试剂,充分混匀后瞬时离心。按照20 μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管。

2.样本准备(样本处理区)

用QIAGEN、Roche公司RNA提取试剂盒提取RNA,具体操作按照其试剂盒说明书操作。

3.加样

在上述制备好的PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本RNA各5 μl、终体积25 μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加5 μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品,终体积为25 μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。

4. PCR(PCR扩增区)

(1)取样本处理区准备好的PCR反应管,放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置,并记录放置顺序。

(2)按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。

小反刍兽疫病毒实时荧光PCR试剂盒

 

反应体积

25 μL

通道选择

FAM通道采集病毒荧光信号

PCR

反应

条件

步骤

条件

循环数

反转录

 42℃:10分钟(min)

1

预变性

95℃:3分钟(min)

1

预扩增

95℃:5秒(s)

5

55℃:40秒(s)

PCR扩增

95℃:5秒(s)

40

55℃:40秒(s)

(此阶段结束时采集荧光信号)

注:ABI系列荧光PCR仪在设置时不选ROX校正,设置淬灭基团选择None。

【参考值(参考范围)】

1.试剂盒有效性判定:

(1)阳性对照:有典型S型扩增曲线或Ct值≤35。

(2)阴性对照:Ct值>38或无Ct值,线形为直线或轻微斜线,无指数增长期。

2.标本结果判定:

(1)阳性:标本检测结果Ct值≤35或有明显指数增长期。

(2)可疑:标本检测结果Ct值在35~38范围内。此时应对标本进行重复检测,如重复实验结果Ct值仍在35~38范围内,有明显指数增长期,则判定为阳性,否则为阴性。

(3)阴性:标本检测结果Ct值>38或无Ct值。

【检验结果的解释】

通道及检测结果

标本检测结果解释

FAM

阳性(+)

标本中检出病毒RNA

阴性(-)

标本中未检出病毒RNA

【检验方法的局限性】

1. 当检测样本中被检核酸浓度低于本试剂盒的低检出*可能会发生假阴性的结果。

2. 被检样本在采集、运输、储存以及处理过程中操作方式不当容易造成RNA降解而产生假阴性结果。

3. 样本在采集、运输、储存以及处理过程中发生交叉污染,则容易得到假阳性结果。

【产品性能指标】 产品的低检出限为102 Copies/mL,产品CV值≤5%。

【注意事项】

1. 整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作,各区实验服、仪器、耗材应独立使用,不能混用;实验用吸头采用带滤芯吸头;样本处理区应配有生物安全柜,样本处理在生物安全柜中进行操作;三个区应该配有紫外线杀菌装置。

2. 为避免RNA降解,样本处理过程应在0-4℃条件下操作,且完成实验后立即上机检测;样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。

3. 每次实验应该设置阴、阳性对照。

4. 试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀,并应瞬时离心。

5. 试剂盒内所配阴性和阳性对照在*次使用前应全部转移至标本准备区,并单独存放。

6. 为防止荧光干扰,应避免裸手直接接触PCR反应管,并应避免在PCR反应管上进行任何标记。

7. 仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置;不同批号试剂不能混用。

8. ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正,淬灭基因选择None。

9. 实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。

小反刍兽疫病毒实时荧光PCR试剂盒



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