长春水套式CO2培养箱HH.CP-TW细胞培养

长春水套式CO2培养箱HH.CP-TW细胞培养

包括营养液、胰酶、清等。

清特别重要。清必须贮存于 –20℃，如果一次无法用完一瓶，可将 40～50ml 分装于无菌酸处理瓶中，甚至置青霉素瓶保存。一般厂商提供的清为无菌，不需再无菌过滤。若发现清有许多悬浮物，则可将清加入培养基内一起过滤，勿直接过滤清。（一般情况下不影响细胞培养）

瓶装清一定要逐步解冻: 4℃ 冰箱全溶后再分装，在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。

热灭活是指 56℃，30 分钟加热已*解冻之清。水浴锅升到 56℃后，将清放入，待温度升高到 56℃ 后计时，一般 5 分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响清之品质。注意更换新清（包括不同批次）对细胞的影响。

7、无菌意识要强

实验进行前，超净台以紫外灯照射 30 分钟灭菌，以 70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启超净工作台风扇运转数分钟后，才开始实验操作。

每次操作只处理一株细胞株，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以 70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。

无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置，其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以 70% 乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域，一般勿在边缘区域操作。

小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约 45° 角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。

长春水套式CO2培养箱HH.CP-TW细胞培养技术参数:

准备

    细胞冻存液（20%清、10%DMSO、70%基础培养液），梯度降温盒

（2） 步骤

        1.选取活力好，密度约70%细胞用于冻存，此时细胞处于对数生长期，适合用于冻存。

        2 .细胞吹打或者胰酶消化后，转移至无菌EP管，1000rpm里面5min。

        3.弃上清，加入新鲜配制的细胞冻存液，25T细胞可以加入2ml细胞冻存液，分装2个冻存管，细胞密度为5*106-1*107个每ml。

        4.做好标记，放入梯度降温盒（提前平衡至室温）。

        5.将梯度降温盒放入-80℃冰箱过夜，第二天取出冻存管，快速放入液氮保存。

氧化碳培养箱是进行细胞培养的必要设备，那么在培养细胞时有哪些经验是我们可以借鉴的呢？下面让我们一起来看一下。

1、启蒙老师的重要性

一般进实验室都有师兄师姐带着做，他们就是你做细胞的启蒙老师。他们的操作手法、细节、理论讲解就成了你操作的准则，如营养液、细胞瓶的摆放位置；灭菌处理程序；开盖手法；细胞吹打手法等等。要学会他们的正确操作，在*次的时候就要重视。

2、像养孩子一样养细胞

细胞真的很脆弱，每天都去看看它，以防止出现培养箱缺水、缺二氧化碳、停电、温度不够等异常现象，也好及时解决这些意外，避免重复实验带来的更大痛苦。

3、好细胞要及时保种

细胞要分批传代，这样即使有一批出了问题，还有一批备用的。像后者一般人可能不容易做到。有一次细胞污染了，全军覆没。当时可后悔没有保种。

4、每种细胞都有自己的特性，要区别对待。

细胞跟人一样，不同的细胞，培养特性是不一样的。培养过程中要细细体会。不同细胞株使用不同的培养基和清。

如平滑肌细胞很活跃，喜欢热闹，2~3 天就好多人口，而且不太爱吃喝，真是养的孩子了。内皮细胞和平滑肌细胞性格相近，不过它很不讲，也很邋遢，里面有很多分泌屋，要经常换洗才行。RAW264.7 细胞也很开朗，而且很能吃，要经常喂它，头疼的是细胞很容易活化，培养它的瓶子和环境没有内毒素才好。