肝内胆管上皮细胞 肝内胆管上皮细胞

　　购买国外细胞株需要考虑的因素有如下几点：1、细胞株的生物等级，由于有些细胞株及菌株属于管制品，所以从国外购货比较麻烦。2、在购买国外细胞株时，需交待国外加比较多的干冰（一般在13公斤以上，采用比较密封的泡沫盒加套纸箱）。 293F细胞，上海乾思生物公司细胞近3000种，来源于美国ATCC,细胞都是经过严格质量控制，在中国大陆努力搭建正牌细胞与国内广大科研人员之间的沟通桥梁。293F细胞外，还有更多相关实验产品，标准品，细胞株和实验技术服务等等前期后续服务。　

293F细胞* 细胞冻存 *
　　目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由冰晶形成的细胞损伤。
1、10%的DMSO+90%胎牛血清。甘油一般用于菌种保存很少用于细胞冻存。
2、取对数生长期的细胞，用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来，悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中。
3、离心1000 rpm,5 min。
4、去除胰蛋白酶及旧的培养液，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的zui终密度为5x10^6/ml~1x10^7/ml。
5、 在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者。
6、冻存：标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/min；当温度达到-25℃以下时，可增至-5℃~-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。

购买上海乾思物细胞注意事项（乾思生物）发布
　　一、客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；
　　收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
　　二、如为贴壁细胞，请在显微镜下观察细胞密度：
　　1.  未超过80%汇合度时，用75%酒精（建议配置75%酒精的水也是灭菌超纯水，喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作；然后打开盖子，先用枪头把培养基吸出10ml左右，放在离心管里，然后瓶口过火（严禁直接倾倒），这样可以保证不污染，再用10ml的移液管，将剩余的培液全部吸出，放于离心管中，培养瓶中只剩余10ml左右培液就可以了。培养16hr(时间根据细胞生长情况调整）之后，传代或者冻存。
　　2. 超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。具体步骤如下：
　　1) 弃去培养液，用3ml PBS（不含钙，镁离子）洗1-2次；
　　2) 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM  EDTA）于T25培养瓶中，倒转放于37度培养箱1-3分钟预热，然后又将培养瓶倒转大约30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆分散，轻敲几下培养培养瓶，细胞随即脱落下来；
　　3) 加入6-8ml*培养基，吸出，分到新的培养瓶中，按要求分瓶。
　　三、如为悬浮细胞，吸出培养液，1000转/分钟离心5分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
　　注意：换液时一半用我们的培养基，一半用你们的，以免细胞不适应而造成生长不好。
　　四、细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？
　　（1）细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、破损、漏液等，重发；
　　（2）冻存的细胞复苏后，绝大多数细胞未存活，重发；
　　（3）存活的细胞静置24小时后，绝大多数细胞未存活，重发；
　　（4）冻存的细胞复苏后或存活的细胞静置4小时后并且未开封，出现污染，重发；
　　（5）视具体情况而定。
　　五、细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
　　（1）客户造成细胞污染，不重发；
　　（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
　　（3）细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；
　　（4）细胞培养时经其它处理的，不重发；
　　（5）细胞收到2天内，未告知，不重发；
　　（6）视具体情况而定。
　　六、售后服务政策
　　Acris  abcam  cst  Biorbyt  santa  Novus  sigma  lifespan   NEB  roche  ABI  R&D millipore   BD  Qiagen Cayman  Jackson Life  GeneTex    Bio-Rad DSHB  tocris   peprotech 等品牌；部分产品现货，超低比价，另常备  Trizol  DMSO  lipo2000     lipo3000  SC-2004  SC-2005常备现货 ；货期短，价格优，售后齐全。
　　细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果；细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，我们调查核实后予免费调换，不收取任何费用。
　　需要客户关于293F细胞细胞培养说明、细胞操作处理方法、细胞质量问题反馈表。
　　如用户收到细胞8-30天之内，因处理不当造成细胞死亡或污染，我公司将优惠价重新提供一株原细胞
　293F细胞质量可靠，售后有保障
★我库细胞近3000种，来源于美国ATCC,细胞都是经过严格质量控制。
冻存细胞时间为5-7个工作日，活细胞为7-15个工作日。
★由于细胞库现有细胞类目多，为了不出现混乱错误，需要了解293F细胞相关细胞价格及详细资料请老师，对您造成的不便还请见谅！
（编辑：tanxi）