烟草疫霉培养

资源名称:烟草疫霉培养

种属: phytophthoranicotianae
分离基物     丝瓜疫病植株
安全等级     1
模式菌株     no
应用领域     丝瓜品种抗性水平鉴定
培养方法     
培养基     14
生长条件     25-28°C

烟草疫霉培养注意事项：
1.  取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。
2.  冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜（DMSO）对细胞不是*无毒副作用，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作 较大，因此，必须在1-2min内使冻存液*融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜（DMSO）选择进口产品。
3.  离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。
4.  离心问题：目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。因为离心的目的是两个，去除 DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大， 死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜（DMSO），DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液 体前倒净，且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏，结果无有异常。
5.  细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时1ml细胞液要加10ml－15m培养液，而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。
6.  复苏细胞分装的问题：试验中我的经验总结为复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。
7.  加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题是DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响 细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于0.5%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是1％。所以如果你的冻存液的浓度是 10％DMSO的话那么加10ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。

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检测方法： 
1．将病人标本和/或液状对照品放至室温（15-30℃），轻轻混匀。测试前从包装袋中取出检测卡平放。
2．将1根Binax样本拭子浸入要测试的标本中，*浸没拭子头。如果拭子有滴水，将拭子靠在收集容器的边上，排去多余的液体。
3．检测卡内部的右手边有两个孔，将拭子插入底部的孔中（拭子孔），稳步向前推，使整个拭子头在上部的孔中可见，不要取出拭子。
4．垂直持放A试剂瓶，高出检测卡上方1/2到1英寸，慢慢向底部的孔中加入3滴A试剂。
5．立即从检测卡的右缘揭去粘附衬，封闭检测卡，过15分钟在窗口判读结果。15分钟后读取的结果可能不准确。然而，有些阳性病人不到15分钟就出现可见样品线。α,α'-双(4-羟-3,5-二甲)-1,4-二异丙英文名称：Alpha,alpha'-bis(4-hydroxy-3,5-DIMETHYLPHENYL)-1,4-twoCumeneCAS号：36395-57-0分子式：402.58分子量：C28H34O2
4-羟-5-嘧英文名称：4-hydroxy-5-cyanopyrimidineCAS号：4774-34-9分子式：121分子量：C5H3N3O
1--2-甲萘英文名称：1-amino-2-CAS号：2246-44-8分子式：157.21分子量：C11H11N
6-甲氧喹哪英文名称：6-,whichisCAS号：1078-28-0分子式：173.22分子量：C11H11NO
3-(2'-甲)-1H-吡唑英文名称：3-(2'-methylphenyl)-1H-CAS号：59843-49-1分子式：158.1998分子量：C10H10N2
介子苷分子式：415.48分子量：C10H18KNO10S2英文名称：Black-------CAS号：64550-88-5
对甲酚分子式：108.14分子量：C7H8O英文名称：ParacresolCAS号：106-44-5
维多利亚蓝B分子式：506.08分子量：C33H32ClN3英文名称：VitoriablueBCAS号：2580-56-5
羟丙茶碱分子式：238.24分子量：C10H14N4O3英文名称：TheodenCAS号：603-00-9胰蛋白胨/胰蛋白胨/TryptoneBR250/500克国产/进口
Saos-2，人成骨肉瘤细胞
LA795(小鼠肺腺细胞)5×106cells/瓶×2
NCI-H524(人非小细胞肺细胞)5×106cells/瓶×2gersion
U-87 MG(人神经胶质瘤细胞)5×106cells/瓶×2
Lec1(仓鼠卵巢细胞)5×106cells/瓶×2
Hep G2(人肝细胞)5×106cells/瓶×2
Candida Elective 琼脂/BiGGY琼脂/坎迪达尼克森选择性琼脂/铋甘氨酸葡萄糖酵母琼脂/BiGGY Agar食品中Candida及酵母菌总数测定250克国产/进口
Tissue Protein Extraction Reagent/组织蛋白抽提试剂25次、100次国产
一步法Western封闭液100ml100ml
Jurkat, Clone E6-1 (人急性T淋巴细胞白血病细胞)5×106cells/瓶×2
性蓝40分子式：473.43分子量：C22H16N3NaO6S英文名称：Acidblue40CAS号：6424-85-7
二十三分子式：354.61分子量：C23H46O2英文名称：Twenty-threeacidCAS号：2433-96-7
落新妇苷分子式：450.39分子量：C21H22O11英文名称：AstilbinCAS号：29838-67-3
茜素黄R分子式：287.23分子量：C13H9N3O5；O2NC6H4<英文名称：AlizarinYellowRCAS号：2243-76-7