葡聚糖凝胶 LH-20 Sepandex LH-2

葡聚糖凝胶 LH-20 Sepandex LH-2

Sepandex G-10、G-25糖凝胶是在水溶液中使用，若要用有机溶剂作为流动相，需要通过羟丙基化将Sepandex G转化为可在有机溶剂中溶胀的羟丙基葡聚糖凝胶，Sepandex LH-20。

葡聚糖凝胶 LH-20 Sepandex LH-2

水木清华2006在小木虫的回答

1 Sephadex LH20是一种价钱较高的填料，使用请千万注意，很贵的哟！

（当然，老板有钱的话就另当别论）
2 先讲Sephadex LH20 的原理。 Sephadex LH20的分离原理主要有两方
面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。因为凝胶
过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留
强，zui后出柱。如果使用反相溶剂洗脱， Sephadex LH20对化合物还起反相
分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保
留强，后出柱。如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。
3 再讲Sephadex LH20 洗脱溶剂。听我讲完 第2点后，其实就应该清楚Seph
adex LH20 洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。用得zui多的是反相溶剂
洗脱，以甲醇--水系统zui为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，zui后用10
0％甲醇冲柱。正相系统以氯仿--甲醇zui为常见，先用50％氯仿--甲醇，
逐渐增加甲醇比例，zui后用100％甲醇冲柱。
4 接下来讲样品的处理和洗脱溶剂的选择。如果样品极性大，这选用反相溶剂
洗脱（甲醇--水），样品用zui少体积的甲醇--水（尽可能甲醇少一些）溶
解，过滤后，湿法上样（一定要滤喔！要是把Sephadex LH20 堵啦，就得将
Sephadex LH20 的柱头部分弃去，很心痛呀）。如果样品极性小，这选用正
相溶剂洗脱（lv仿--甲醇），样品用zui少体积的氯仿--甲醇溶解，过滤
后，湿法上样。
5 分离的技巧，zui后说说我的使用心得
（1） 流速不可太快，切切不可新急，所谓欲速则不达。
（2）柱子尽可能长， Sephadex LH20 柱长的增加将*地改善分离，所不
要吝惜填料，宁可将填料全装在一根大柱子中，不要将填料装成几根小柱。所
谓集中优势兵力，打击敌人。
（3） 馏分一定要接的细，可1／10，或1／20 个保留体积接成一馏分。
（4） 洗脱体积一般为2-3个保留体积，对特殊保留强的化合物，可洗脱5个保
留体积。
（5）鞣质成分死吸附严重，如不在乎填料者，可用Sephadex LH20 分鞣质
（6）Sephadex LH20 对黄酮类成分的分离效果，方法很成型，有大量
文献参考。
（7）填料反复使用，每次用完，一般可用甲醇将柱子洗干净，然后用下一次分
离的起步溶剂将甲醇替换出来，待用。