羊抗人IgM-HRP

（一）???酶标抗体结合物的纯化??
在酶标记的溶液中，出现的是各种交联物的混合物,有酶－抗体、酶－抗体－酶、抗体－抗体、酶－酶，甚至还有游离的酶和抗体。在这中间,除了抗体－酶和酶－抗体－酶外,其它都应该给予除去。
1．50%饱和硫酸铵沉淀法。?此法只能除去游离的酶及酶－酶聚合体。而不能除去其它不需要者。但是此法对酶标抗体的损耗少。
2．过SephadexG200或Sepharose－6B柱。此法较繁琐,而且对酶标抗体的损耗较大,但提纯的质量好。
（三）酶标抗体的鉴定
1．酶标抗体的活性鉴定??一般以琼脂扩散和免疫电泳进行鉴定。使酶标抗体和相应的抗原（抗原浓度为1mg/ml）产生沉淀线,洗涤后于底物溶液中显色,显色后用生理盐水漂洗,沉淀线*,说明酶和抗体都具有活性。良好的酶标结合物琼脂扩散滴度一般应在1：16以上。
2．酶结合物的定量测定??包括酶量、IgG含量、酶与IgG克分子比值以及结合率的测定。
3．酶结合物的质量标准 纯化的酶结合物的质量标准应包括以下几个方面。
（1）酶的催化活性。
（2）免疫学活性。
（3）未联接的游离酶的量。
（4）未联接的原始免疫反应物的量。
（5）每个酶分子所联接的免疫反应物分子数目。
（6）生化性质。
（7）酶标记免疫试验效果。
酶结合物的质量差异,可引起试验敏感度的很大变化。例如用不同的程序制得的HRP－IgG结合物进行酶标记免疫试验，可得到不同的试验结果，故应予重视。
用于ELISA的各项指标参数见表12－40
表12－4 用于ELISA酶标抗体的各项指标参数评价 好 一般酶结合量（mg/ml） ≥1.0 ≥0.5 0.4酶结合率（%） ＞30 9～10 7酶IgG克分子比 ＞1.5 1.0 0.7