细胞生长曲线的测定

细胞生长曲线的测定实验目的：

掌握绘制细胞生长曲线的原理和方法。

细胞生长曲线的测定背景与原理：

生长曲线是测定细胞生长数的常用方法，也是判定细胞活力的重要指标，是培养细胞生物学特性的基本参数之一。--般细胞传代之后，经过短暂的悬浮后贴壁，随后渡过长短不同的潜伏期，即进入快速生长的指数生长期。在细胞达到饱和密度后，停止生长，进入平台期，然后退化衰亡。为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化，需连续对细胞进行计数。通常计数6天。为精确起见，一般每次实验设3个平行重复。

[材料、试剂与仪器]

1、实验材料:

Hela细胞系。

2、实验试剂:

DMEM培养基(青霉素，链霉素，10%血清) ，0.25%胰蛋白酶溶液， 台酚蓝染液。

3、实验仪器:

超净工作台，CO2培养箱，倒置显微镜，微量移液器，血细胞计数板，培养瓶，离心管,移液管，废液缸，盖玻片, 24孔板。

[方法与步骤]

1、取生长良好的细胞，用培养基制成细胞悬液后计数。根据细胞计数结果按5x104/mL作传代培养接种于24孔板中，共接种21孔细胞。1 m/孔。余下三孔可设传代培养的对照。

2、24h后每天记录细胞数目，每次取3孔细胞，分别进行计数。计算平均值。连续计数7d。细胞用胰酶消化后加入一定量的培养基,混匀制成细胞悬液。取少量悬液与台酚蓝1:1混台。取一干净的血细胞计数板,盖上盖片，从盖片两边滴入细胞悬液使之充满计数板和盖片之间。注意滴液勿有气泡，也不能太多，否则会使盖片浮起而使细胞计数不准。

3、低倍镜下观察，活细胞不着色，台盼蓝着色的细胞呈深蓝色，是不健康或已死亡的细胞，不能计数。

找出计数板上的方格，计算四角大格内总细胞数，大格线者只计左侧和上方，不计右侧和下方细胞悬液中细胞

密度计算公式为:细胞数/mL= (四角大格内细胞数/4) x104x2

4、根据细胞计数结果，以单位细胞数(细胞数/mL)为纵坐标，以时间为横坐标绘制生长曲线。

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