普鲁士蓝染色试剂盒(Perls stain)
普鲁士蓝染色试剂盒说明:
含铁血黄素(Hemosiderin)是一种血红蛋白源性色素,为金黄色或棕黄色颗粒,因其
含铁、金黄色,故称为含铁血黄素。当红细胞被巨噬细胞吞噬后,在溶酶体酶的作用下,血
红蛋白被分解为不含铁的橙色血质和含铁的含铁血黄素。
Perls 普鲁士蓝反应(Prussian blue reaction)又称为含铁血黄素染色,即经过亚铁氰化
钾和稀酸处理后可以产生蓝色,常见于吞噬细胞内会间质内,主要显示三价铁盐。Perls 普
鲁士蓝是非常经典的组织化学反应,是显示组织内三价铁的一种敏感、传统优良的方法,其
染色原理为:亚铁qing hua jia溶液使三价铁离子从蛋白质中被稀盐酸分离出来,三价铁与亚铁氰
化钾反应,生成一种不溶解的蓝色化合物即三价铁的亚铁氰化物普鲁士蓝,所以该反应被称
为普鲁士蓝反应。三价铁的亚铁氰化物是一种很稳定的化合物,在反应后可用红色染色剂进
行复染,如核固红、伊红、中性红等。
Perls stain 常用于显示局部组织内各种出血性病变,常见于吞噬细胞内。在判断含铁血
黄素沉积时,用Perls 反应可以得到证实,该染色方法可以很好的区分含铁血黄素和其他色
素。该染色液稳定性好、可以*保存、不易产生沉淀、应用范围广、可以进行复染。
普鲁士蓝染色试剂盒(Perls stain,伊红法),其复染液采用伊红染色液,也是常用的复
染液,该复染液染色时间较核固红染色液要短。
普鲁士蓝染色试剂盒组成:
Perls stain A
Perls stain B
临用前,取A1、A2 等量混合,即为试剂(A)Perls stain,不宜提前配制。、
试剂(B): 伊红染色
液 50ml
使用说明书
主要成分:
试剂(A): 主要由亚铁qing hua jia、稀酸等组成。
试剂(B): 主要由伊红、防腐剂等组成。
自备材料:
1、10%的中性福尔马林
2、系列乙醇
3、蒸馏水
4、4%的多聚甲醛
普鲁士蓝染色试剂盒操作步骤(仅供参考):
(一)石蜡切片染色
1、 切片脱蜡至水
① 二甲苯(Ⅰ) 5~10min
② 二甲苯(Ⅱ) 5~10min
③无水乙醇(Ⅰ)(可选) 3~5min
④无水乙醇(Ⅱ)(可选) 3~5min
⑤95%的乙醇 3~5min
⑥90%的乙醇 3~5min
⑦80%的乙醇 3~5min
⑧自来水或蒸馏水冲洗(Ⅰ) 1~3min
⑨自来水或蒸馏水冲洗(Ⅱ) 1~3min
2、染色
①切片入Perls stain(见注意事项6) 15~30min
②蒸馏水充分冲洗 5~10min
③伊红染色液淡染细胞核 15~30s
④自来水冲洗 1~5s
3、脱水、透明、封固
①90%乙醇 10~20s
②95%乙醇(Ⅰ) 1~2min
③95%乙醇(Ⅱ) 1~2min
④ 无水乙醇(Ⅰ) 2~3min
⑤无水乙醇(Ⅱ) 2~3min
⑥ 二甲苯(Ⅰ) 2~3min
⑦二甲苯(Ⅱ) 2~3min
⑧ 二甲苯(Ⅲ) 2~3min
⑨中性树脂封片。
(二)冰冻切片染色
1、 无需脱蜡,直接迅速用蒸馏水冲洗2~3min。
2、 染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤。
(三)细胞染色
1、4%多聚甲醛固定10~20min。
2、自来水冲洗2 次,每次2min。
3、蒸馏水冲洗2 次,每次2min。
4、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤。
染.结果:
含铁血黄素或三价铁 蓝色
细胞核、其他组织 红色
阴性对照(可选)
取相同连续切片脱蜡至水。置于5%的草酸中,孵育2-6h 后,经Perla stain,需要步骤
同上。结果为阴性。
普鲁士蓝染色试剂盒注意事项:
1、 切片脱蜡应尽量干净。
2、 组织固定常采用10%的中性福尔马林,经普通福尔马林*固定后,组织会有损伤。
3、 临用前取A1、A2 液等量混合,即为试剂(A),现配现用,不可提前配制。
4、整个操作过程中容器要干净,避免使用金属铁制品,洗切片和容器时以蒸馏水为宜,因
普通水内含铁质。
5、避免使用酸性固定剂,铬酸盐处理也会妨碍铁的保存。
6、Perls stain 染色时,应根据样品情况调整着色时间。
7、 所有检查切片都应使用同一个阳性对照切片,选择适合的对照非常重要.尸检肺组织是一
个很好的对照,包含相当数量的铁阳性巨噬细胞(心衰细胞).
8、95%乙醇、90%乙醇应经常更换新液.
9、 冰冻切片和细胞的染色,应根据具体情况摸索实验条件.
10、 为了您的健康和安全,请穿实验服并戴一次性手套操作.
普鲁士蓝染色试剂盒有效期:12个月
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