[肝癌细胞]Hep3B细胞传代的一般方法:
开始[肝癌细胞]Hep3B细胞传代前,仔细检查细胞传代所需的仪器和试剂是否齐全:一般主要有:[肝癌细胞]Hep3B细胞(单层细胞,镜检适合)、培养液(MEM-0.2%LH培养液或MEM培养液或199等适合细胞有要求的培养液)、灭活小牛血清、庆大霉素溶液(1万单位)、7.5%NaHC03溶液、0.25%胰蛋白酶、PBS洗液。
[肝癌细胞]Hep3B细胞技术步骤:
①将对数生*的[肝癌细胞]Hep3B细胞浓度调整为1~10×104细胞/ml,按103~104个细胞接种于96孔板,每孔100 μl;
②培养[肝癌细胞]Hep3B细胞24小时后,对其进行不同处理,每个处理设三个平行对照;
③(MTT法):适当培养时间后,取出[肝癌细胞]Hep3B细胞,倒掉培养液,每孔加入5 mg/ml新鲜配制的MTT溶液,温育4小时,再次倒掉上清液,每孔加入200 ml DMSO,摇匀后,酶标仪检测吸光值。
(台盼蓝拒染法):适当培养时间后,收集细胞,经台盼蓝染色,在倒置显微镜下计数蓝染及不染色细胞,计算细胞存活率。
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