黄曲霉毒素是一种肝脏毒素,对人和许多动物都有*的致癌性,其中黄曲霉毒素B1毒性zui大,致癌性zui强。因此,食品中黄曲霉毒素B1的检测是非常重要的。下面介绍的分离及测定黄曲霉毒素的方法——固相酶联免疫法是常规分析中常用的一种重要方法。
一、 原理
CSY-E96H黄曲霉毒素快速检测仪 (黄曲霉素快速检测仪|黄曲霉素检测仪|黄曲霉毒素测试仪)采用固相酶联免疫吸附ELISA的原理,即酶联免疫法;可定量检测粮食、食品、饲料、油脂、乳制品、药物、饮料、牛奶、酒等产品中的黄曲霉毒素(B1,B2,G1,G2 M1 M2 AFM1、AFP1、AFQ1、AFB1-2,3-环氧化物)含量。
快速检测实验操作所需的试剂及材料:微孔板 包被有AFB1-BSA;5个浓度的AFB1标准溶液各(1mL)可直接使用;标准1:0ng/mL 可直接使用;标准
2:1.0ng/mL可直接使用;标准
3:2.0ng/mL 可直接使用;标准
4:5.0ng/mL可直接使用;标准
5:10.0ng/mL 可直接使用;AFS单克隆抗体溶液(6mL)可直接使用;酶标物(12mL)可直接使用;显色液(12mL);终止液(6mL);浓缩洗液(30mL) ;空白对照(6ml)微孔板酶标仪(含450nm):定量分析用;振荡器,粉碎机,微量移液器,量筒,漏斗和容量瓶,快速定性滤纸;试剂:氯化钠(分析纯)、甲醇(分析纯)、去离子水或蒸馏水
检验操作注意事项:标准溶液中含有黄曲霉毒素,应特别小心。使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液用pH7的次氯酸溶液(10%v/v)浸泡。终止液为0.5N硫酸,避免接触皮肤。不要交换使用不同批号盒中的试剂。
黄曲霉毒素B1检验实验样品前处理:样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存,取5g粉碎的有代表性的样品,加1.25g氯化钠及25mL70% 甲醇-水,强力振荡3分钟;用快速定性滤纸过滤;取1mL滤液,用1%氯化钠溶液稀释10倍;取50μL稀释液进行分析;据需要可以增加样品量,但甲醇溶液的量也应相应增加。
检验实验注意事项和测定程序:每次加样后立即将所有试剂放回2-8 ℃,每步操作时间控制在5min内, 孵育过程中应避光。测定程序1. 取所需数量的板条插入微孔架,记录样品及标准的位置。
2. 加入50mL标准品或处理好的样品到微孔,每个标准和样品必须使用新的吸头。
3. 将50mL黄曲霉毒素B1单克隆抗体使用液加入到每个微孔(注意移液器管尖不要接触到放进孔中的液体,避免交叉污染),在适当位置孔加空白对照液100mL,37℃孵育90min。4. 甩掉孔中液体,用洗液洗涤微孔板3min×3次,zui后一次应在吸水纸上拍打以*除去孔中液体。
5. 每孔加入酶标物100mL,37℃孵育60min。
6. 甩掉孔中液体,用洗液洗涤微孔板3min×3次,zui后一次应在吸水纸上拍打以*除去孔中液体。
7. 每孔加入显色液100mL(2滴),37℃孵育10 min -12min
8. 每孔加入终止液50mL(1滴),立即用酶标仪在波长为450nm处测定吸光度值(OD值)。
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