产品推荐:气相|液相|光谱|质谱|电化学|元素分析|水分测定仪|样品前处理|试验机|培养箱


化工仪器网>技术中心>其他文章>正文

欢迎联系我

有什么可以帮您? 在线咨询

染色体CBG标本制备实验技术

来源:上海雅吉酶联免疫科技公司   2015年01月08日 10:33  

异染色质在整个分裂间期及分裂期都是浓缩的,因而其大小较为恒定。它们通常位于着丝粒附近,或在染色体臂上呈现“团块”,这些染色质主要由C显带技术呈现,故称为C带。CBG即C带、Ba(OH)2、Giemsa的简写。C带的根本特征是选择性地从染色体臂抽取DNA,但在C带区有很强抗性,仍保留大部 分DNA,Giemsa染色后可见效果良好的C带。
实验方法
基本方案
实验方法原理    
异染色质在整个分裂间期及分裂期都是浓缩的,因而其大小较为恒定。它们通常位于着丝粒附近,或在染色体臂上呈现“团块”,这些染色质主要由C显带技术呈现,故称为C带。CBG即C带、Ba(OH)2、Giemsa的简写。C带的根本特征是选择性地从染色体臂抽取DNA,但在C带区有很强抗性,仍保留大部分DNA,Giemsa染色后可见效果良好的C带。

抽取DNA的过程由三个连续操作形成。首先,酸处理可使DNA脱嘌呤,但未使DNA骨架断裂;其次热碱处理可使DNA变性,促进继发的DNA溶解;zui后,热盐溶液使DNA骨架断开并使碎片溶解进入溶液中。因此,zui终以Giemsa染料显示出DNA的不同分布。在优良的C带标本中,常染色质只呈现中期染色体的一般外貌,结构异染色质区着色很深。C带在检查1、9、16特别是Y染色体的异质区时尤为重要。
实验材料    染色体标本
试剂、试剂盒    HClBa(OH)2SSCGiemsa染色液
仪器、耗材    恒温水浴箱染色缸显微镜
实验步骤    
一、用品和试剂
0.2N HCl,5% Ba(OH)2,2×SSC,Giemsa染色液。恒温水浴箱,染色缸。其余同外周血染色体制备。
 
二、操作步骤 

基本方案
 
1.   酸处理:常规制作的染色体标本(未染色)置0.2 N HCl(室温)处理15-30分钟。水洗。
 
2.   碱处理:浸入已预温至56℃的5% Ba(OH)2水溶液10分钟。水洗。
 
3.   热盐处理:置2×SSC溶液(67℃)处理60-90分钟。水洗。
 
4.   染色:l∶10 Giemsa染色液染色10-5分钟。水洗。气干。
 
5.   镜检。

替代方案:
 
1.   酸处理:常规制作的染色体标本(未染色)置0.2 N HCl(室温)处理60分钟。水洗。
 
2.   碱处理:浸入1% Ba(OH)2水溶液(50℃)中15-20秒。水洗。
 
3.   热盐处理:置2×SSC溶液(60℃)90分钟。水洗三次。
 
4.   染色:l∶10 Giemsa染色液染色10分钟。水洗。气干。
 
5.   镜检。

免责声明

  • 凡本网注明“来源:化工仪器网”的所有作品,均为浙江兴旺宝明通网络有限公司-化工仪器网合法拥有版权或有权使用的作品,未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。已经本网授权使用作品的,应在授权范围内使用,并注明“来源:化工仪器网”。违反上述声明者,本网将追究其相关法律责任。
  • 本网转载并注明自其他来源(非化工仪器网)的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点和对其真实性负责,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品第一来源,并自负版权等法律责任。
  • 如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起一周内与本网联系,否则视为放弃相关权利。
企业未开通此功能
详询客服 : 0571-87858618