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EMC-500A高速逆流色谱仪
分离邻二苯酚，间苯二酚流程
一． 仪器条件
1. EMC-500A高速逆流色谱仪
转向：正向（正向定义：见仪器标识）；转速：800转/分钟
2. 8823B紫外检测器
波长254纳米；灵敏度2A
3. EMC-P10泵
流量2毫升/分钟（压力保护值设定1mpa）
4. 3057记录仪
纸速：6厘米/小时；量程：100mv
5. 进样器：2毫升
二． 连接管路
连接顺序：溶剂—滤头—泵入口（下）—泵出口（上）—进样器入口（“接输液泵”）—进样器出口（“接制备柱”）—主机管路入口（标记端）—主机管路出口—检测器入口（下）—检测器出口（上）—收集瓶（初期建议使用100ml量筒，以辨认液体分层）
注意：用手拧接头组件（不提倡使用扳子等工具，以免超负荷损坏）连接管路完成后，泵入蒸馏水以检查管路有无液体异常泄露。
三． 溶剂系统：共1000毫升
1. 正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水=1/0.8/1/0.8（V/V）（所用溶剂均为分析纯）
2. 固定相：上相 流动相：下相
3. 样品：邻二苯酚（化学纯，市售厂）
4. 间苯二酚（分析纯，市售）
四． 操作过程
1. 配制溶剂系统
按正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水=1/0.8/10.8（V/V体积比）共1000ml，用量筒至一玻璃容器内，脱气，分层分离。——在实验开始前1天，将溶剂配置在同一玻璃容器（推荐磨口三角瓶）内混合震摇，注意排气，超声波脱气30分钟后，移液至同一分液漏斗密闭静置饱和。在实验开始前1小时内，将两相溶剂分开放置在两玻璃容器内，并密闭静置，防止蒸发。
按正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水=1/0.8/10.8（V/V体积比）共1000ml，用量筒至一玻璃容器内，脱气，分层分离。——在实验开始前1天，将溶剂配置在同一玻璃容器（推荐磨口三角瓶）内混合震摇，注意排气，超声波脱气30分钟后，移液至同一分液漏斗密闭静置饱和。在实验开始前1小时内，将两相溶剂分开放置在两玻璃容器内，并密闭静置，防止蒸发。
2. 样品制备
在一玻璃容器内将预先使用天平称量的80毫克邻二苯酚和100毫克间苯二酚混合物溶于3毫升下相中，超声波脱气（溶解至溶液内无固体，如有固体应过滤，以防止塞管路），并密闭静置，防止蒸发。
在一玻璃容器内将预先使用天平称量的80毫克邻二苯酚和100毫克间苯二酚混合物溶于3毫升下相中，超声波脱气（溶解至溶液内无固体，如有固体应过滤，以防止塞管路），并密闭静置，防止蒸发。
3. 连接泵
将泵入口（下）连接的滤头放入固定相（上相）瓶内，*浸入液面以下闭合泵电源开关，启动泵，设定压力保护值1mpa（兆帕）。按ph键。
设定流量：9.99ml分钟，按L键，按999，使数字显示为999，按run键。用9.99ml/分钟流量向主机内泵入固定相（上相），注意管路内不要有气体，至充满分离柱柱体，，固定相从主机出口流出5分钟后，停泵——按PAU键。迅速将泵入口（下）连接的滤头换放入流动相（下相）溶剂瓶内，*浸入液面以下。注意管路内不要有气体。
将泵入口（下）连接的滤头放入固定相（上相）瓶内，*浸入液面以下闭合泵电源开关，启动泵，设定压力保护值1mpa（兆帕）。按ph键。
设定流量：9.99ml分钟，按L键，按999，使数字显示为999，按run键。用9.99ml/分钟流量向主机内泵入固定相（上相），注意管路内不要有气体，至充满分离柱柱体，，固定相从主机出口流出5分钟后，停泵——按PAU键。迅速将泵入口（下）连接的滤头换放入流动相（下相）溶剂瓶内，*浸入液面以下。注意管路内不要有气体。
4. 检查主机状态与管路状态。
仪器主机放置在平稳、坚实、安全的水平平面上，仪器地脚与平面间放置厚约3毫米的隔震硬橡胶板，仪器地脚调实。环境：湿度10—30摄氏度，通风良好，禁止无关人员停留与过往。远离易燃易爆物品和场所。
打开主机上盖，润滑主机解绕管，加洁净润滑油3－4滴，轻触机内运动部分使其正向旋转3－4圈，以检查有无异常。无异常，关盖锁紧。
仪器主机放置在平稳、坚实、安全的水平平面上，仪器地脚与平面间放置厚约3毫米的隔震硬橡胶板，仪器地脚调实。环境：湿度10—30摄氏度，通风良好，禁止无关人员停留与过往。远离易燃易爆物品和场所。
打开主机上盖，润滑主机解绕管，加洁净润滑油3－4滴，轻触机内运动部分使其正向旋转3－4圈，以检查有无异常。无异常，关盖锁紧。
5. 调整紫外检测器
详见紫外检测器说明书调整紫外检测器波长到254nm：（在切断市电的情况下）解脱紫外检测器光源插头座，旋开光源固定螺母，取出空心阴极灯，用紫外检测器工具将挡圈选下，取出（出厂时已装上的）280nm滤光片。装入透紫玻璃，将挡圈旋紧，再将灯放回原处，旋紧光源固定螺母，接好光源插头座。将波长转换开关置于254处。小心安妥保管280nm滤光片，并做标记（注：在不使用280nm灯时，均应/可置于254处——衰减大）紫外检测器-在逆流色谱仪主机运转开始前40分钟通电预热。
详见紫外检测器说明书调整紫外检测器波长到254nm：（在切断市电的情况下）解脱紫外检测器光源插头座，旋开光源固定螺母，取出空心阴极灯，用紫外检测器工具将挡圈选下，取出（出厂时已装上的）280nm滤光片。装入透紫玻璃，将挡圈旋紧，再将灯放回原处，旋紧光源固定螺母，接好光源插头座。将波长转换开关置于254处。小心安妥保管280nm滤光片，并做标记（注：在不使用280nm灯时，均应/可置于254处——衰减大）紫外检测器-在逆流色谱仪主机运转开始前40分钟通电预热。
6. 启动主机：
将后面板转向开关置于“正向”处、闭合速度控制其电源开关：缓慢调节多圈电位器旋钮调整控制器指针（顺时为加速，逆时为减速），显示表指针预定位置，一般取转速800转/分钟。
泵入流动相：设定流量：2.0ml/min。按L键，按200，使数字显示为200，按run键。
注意：在泵入流动相的全部时间内，要求保证泵入口（下）连接的滤头始终*进入流动相（下相）溶剂瓶内液面以下。
将后面板转向开关置于“正向”处、闭合速度控制其电源开关：缓慢调节多圈电位器旋钮调整控制器指针（顺时为加速，逆时为减速），显示表指针预定位置，一般取转速800转/分钟。
泵入流动相：设定流量：2.0ml/min。按L键，按200，使数字显示为200，按run键。
注意：在泵入流动相的全部时间内，要求保证泵入口（下）连接的滤头始终*进入流动相（下相）溶剂瓶内液面以下。
7. 调整紫外检测器灵敏度
闭合紫外检测器电源开关，预热完成后，当流动相进入紫外检测器吸收池中，将量程范围调节钮旋至T档，调节透过率调节旋钮，使数字显示5（mv）-量程低点。T透过率。A吸收度（透过率负对数），数值是以A档为基准的倍率。紫外检测器与记录仪信号连线时应红线对红插座，黑线对黑插座。
闭合紫外检测器电源开关，预热完成后，当流动相进入紫外检测器吸收池中，将量程范围调节钮旋至T档，调节透过率调节旋钮，使数字显示5（mv）-量程低点。T透过率。A吸收度（透过率负对数），数值是以A档为基准的倍率。紫外检测器与记录仪信号连线时应红线对红插座，黑线对黑插座。
8. 闭合记录仪电源开关
设定记录仪：纸速：6厘米/小时。量程：100mv。基线，5mv。并放下记录笔。
设定记录仪：纸速：6厘米/小时。量程：100mv。基线，5mv。并放下记录笔。
9. 进样（将样品液体装进到进样器定量管内）
调整进样器状态使手柄在“进样”标记位。用洁净针筒针头吸取全部样品液体，排除针筒、针筒针头内全部气体，旋松进样器的“进样器”标记处管路口处“？”筒的针头刺入并连接在进样器的“进样器”标记处管路口上。用手旋紧进样器的“进样器”标记处管路口处“外六方金属体”
推进针筒内全部样品液体到进样器定量管内（使液体从进样器“溢出”标记处管路溢出，以便排除管路气体）。
在样品进入定量管内到样品进入柱管前的期间内，注意不要使样品流失。！！
调整进样器状态使手柄在“进样”标记位。用洁净针筒针头吸取全部样品液体，排除针筒、针筒针头内全部气体，旋松进样器的“进样器”标记处管路口处“？”筒的针头刺入并连接在进样器的“进样器”标记处管路口上。用手旋紧进样器的“进样器”标记处管路口处“外六方金属体”
推进针筒内全部样品液体到进样器定量管内（使液体从进样器“溢出”标记处管路溢出，以便排除管路气体）。
在样品进入定量管内到样品进入柱管前的期间内，注意不要使样品流失。！！
10. 进样/接柱
在流动相从检测器出口流出后，将进样器状态调整至“接柱”标记——进样：进样器定量管内样品液体接进到主机分离柱管系统内。进样后约3小时第二峰出完。
在1进样同时，2启动记录仪走纸按键，3放下纪录笔，4调整记录仪状态至走纸，5按回零/测量按键两次，在记录纸上做标记，并确认处于测量状态。6检查泵运行状态，确认泵出的液体正常流出。7纪录实验各项参数，时间，状态等。
收集检测器出口流出液体。以环保方式处理和保管废弃液体。建议：液体暂装容器采用透明无色玻璃，并适当密闭
在流动相从检测器出口流出后，将进样器状态调整至“接柱”标记——进样：进样器定量管内样品液体接进到主机分离柱管系统内。进样后约3小时第二峰出完。
在1进样同时，2启动记录仪走纸按键，3放下纪录笔，4调整记录仪状态至走纸，5按回零/测量按键两次，在记录纸上做标记，并确认处于测量状态。6检查泵运行状态，确认泵出的液体正常流出。7纪录实验各项参数，时间，状态等。
收集检测器出口流出液体。以环保方式处理和保管废弃液体。建议：液体暂装容器采用透明无色玻璃，并适当密闭
图 EMC-500A-HSCCC分离间苯二酚和邻苯二酚的色谱图
五． 试验结束
逆时针调整多调速器圈电位器旋钮归零，关断逆流色谱仪调速器开关，主机运转停止。管段记录仪，紫外检测器电源等开关。因仪器系统能耗不大，建议各仪器市电插头集中就近插放。
实验完毕，立即使用5-10kg压力的洁净空气排出逆流色谱仪主机仪器内大部分液体，洁净空气由主机入口（标记端）管路接入。然后大流量泵入洁净液体冲洗仪器内残留液体。冲洗过程中多次断续切换进样器状态，以冲洗进样器。
主机内残留液体冲洗完毕，切断各仪器电源。针头可留在进样器的“进样器”标记处管路口处，将针管脱离取下。
保留逆流色谱仪主机内洁净液体，待近期下次使用。如近期（1个月以内）不使用逆流色谱仪，需使用洁净空气排出逆流色谱仪主机仪器内全部液体，使用压力0.5-1Mpa,持续时间≧40分钟，保留泵内洁净液体，将泵的液体管路出入口均置于同一容器液体内，待近期下次使用。
六． 提示与警告
慎用或禁用：
1． 含有盐类的液体溶剂系统。
2． 含有易于结晶、沉淀、粘稠的液体溶剂系统与样品。——上述溶剂系统极易于阻塞工作管路，造成仪器的*性损坏。
3． 当工作鼓内缺少液体时禁止仪器运转。
提示：
1. 寒冷的地区/季节/室内，建议给液体和仪器适当温度，以避免内部结晶。
2. 每一次泵入液体前，务必检查/设定泵的压力保护值1Mpa.
3. 变换溶剂系统后，检查/调整平衡。出厂时的配重溶剂系统比重r=1。
4. HSCCC是高速旋转类仪器，请用户对操作者给以明确的安全使用指导。
5. 会影响记录曲线美观的因素：在压力和温度变化时，液体和样品内析出的气体。样品颜色。
保管：仪器存放于0℃以上的洁净通风室内。
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