产品推荐:气相|液相|光谱|质谱|电化学|元素分析|水分测定仪|样品前处理|试验机|培养箱


化工仪器网>技术中心>技术参数>正文

欢迎联系我

有什么可以帮您? 在线咨询

现货小鼠β-肌动蛋白(β-Actin)ELISA试剂盒江西,上饶

来源:研域(上海)化学试剂有限公司   2012年05月14日 09:34  

 小鼠β-肌动蛋白(β-Actin)ELISA试剂盒江西,上饶

本试剂仅供研究使用  标本:血清或血浆

 小鼠β-肌动蛋白(β-Actin)ELISA试剂盒江西,上饶

试验原理:

β-Actin试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知β-Actin浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将β-Actin和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中β-Actin的浓度呈比例关系。

 小鼠β-肌动蛋白(β-Actin)ELISA试剂盒江西,上饶

试剂盒内容及其配制

试剂盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制

96/48人份酶标板1块板(96T)半块板(48T)即用型

塑料膜板盖1块半块即用型

标准品:240nmol/L1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按说明书进行稀稀

空白对照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型

标准品稀释缓冲液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型

生物素标记的抗β-Actin抗体1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型

亲和链酶素-HRP1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型

洗涤缓冲液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按说明书进行稀释

底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型

底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型

终止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型

 

自备材料

1.蒸馏水。

2.加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3.振荡器及磁力搅拌器等。

 

安全性

1.避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。

2.实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

 

操作注意事项

1.试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。

2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。

3.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

4.使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。

5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7.底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。

8.加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

 

样品收集、处理及保存方法

1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4、保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

 

试剂的准备

1.标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:

240 nmol/L(6号标准品)原倍浓度不用稀释直接加入50ul。

120 nmol/L(5号标准品)100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液

60 nmol/L(4号标准品)100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液

30 nmol/L(3号标准品)100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液

15 nmol/L(2号标准品)100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液

7.5 nmol/L(1号标准品)100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液

0 nmol/L(空白对照)原始浓度不用稀释直接加入50ul。

 

2.洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。

 

操作步骤

1.使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。

2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。

3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。

4.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。

6.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

7.每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。

8.取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。

9.在450nm波长处测定各孔的OD值。

 

建议使用的实验方案

标准品浓度(nmol/L)

A240240样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品

B120120样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品

C6060样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品

D3030样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品

E1515样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品

F7.57.5样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品

G00样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品

H样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品

 

 

局限

6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到的结果。

 

试剂盒性能

1. 灵敏度:zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

2. 特异性:不与其它细胞因子反应。

3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。

 

结 果 判 断 与 分 析

1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

 

2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的β-Actin标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的β-Actin含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

 

3、检测值范围:0-240nmol/L

 

4、敏感度: 0.1 nmol/L

D2876-5g2-Deoxy-D-galactose 2-脱氧-D-半乳糖[1949-89-9]
DB2241-10g2-Deoxy-D-glucose 2-脱氧-D-葡萄糖[154-17-6]
D0048-0.25mldGTP 100mM solution 2’-脱氧鸟苷三钠盐5’-三磷酸-溶液/
D0046G-0.5mldGTP 100mM solution 5’-三磷酸-2’-脱氧鸟苷三钠盐溶液/
DD0047-1g2’-Deoxyguanosine, monohydrate 2’-脱氧鸟苷一水[961-07-9]
DB0362-50mgdGDP 2'-Deoxyguanosine-5'-Diphosphate disodium salt 2’-脱氧鸟苷5’二磷酸二钠盐[102783-74-4]
DB0362-250mgdGDP 2'-Deoxyguanosine-5'-Diphosphate disodium salt 2’-脱氧鸟苷5’二磷酸二钠盐[102783-74-4]
DB0363-250mgdGMP 2’-Deoxyguanosine 5’-monophosphate disodium salt 2’-脱氧鸟苷-5’-一磷酸二钠盐[33430-61-4]
DB0363-1gdGMP 2’-Deoxyguanosine 5’-monophosphate disodium salt 2’-脱氧鸟苷-5’-一磷酸二钠盐[33430-61-4]
 

免责声明

  • 凡本网注明“来源:化工仪器网”的所有作品,均为浙江兴旺宝明通网络有限公司-化工仪器网合法拥有版权或有权使用的作品,未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。已经本网授权使用作品的,应在授权范围内使用,并注明“来源:化工仪器网”。违反上述声明者,本网将追究其相关法律责任。
  • 本网转载并注明自其他来源(非化工仪器网)的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点和对其真实性负责,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品第一来源,并自负版权等法律责任。
  • 如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起一周内与本网联系,否则视为放弃相关权利。
企业未开通此功能
详询客服 : 0571-87858618