中华人民共和国国家标准

 GB 31614.1-2023

食品安全国家标准 食品中唾液酸的测定

前言

  本标准代替GB/T 30636-2014《燕窝及其制品中唾液酸的测定 液相色谱法》。

  本标准与GB/T 30636-2014相比，主要变化如下：

  ——修改了标准名称；

  ——修改了方法的适用范围，增加了液态乳、乳粉、糕点、饮料；

  ——明确了燕窝及其制品中测定的目标物质为结合态唾液酸；

  ——增加了液相色谱-荧光检测法和液相色谱-质谱/质谱法。

1范围

  本标准规定了食品中唾液酸的测定方法。

  本标准第一法液相色谱紫外检测法适用于燕窝及其制品中结合态唾液酸的测定，第二法液相色谱荧光检测法和第三法液相色谱质谱/质谱法适用于液态乳、乳粉、糕点、饮料中唾液酸的测定。

第一法 液相色谱-紫外检测法

2原理

  样品在盐酸溶液中加热水解，释放出结合态唾液酸，样品试液用强阴离子交换色谱柱分离，紫外检测器或二极管阵列检测器检测，外标法定量。

3试剂和材料

  除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

3.1试剂及材料

3.1.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。

3.1.2磷酸（H3PO4）：色谱纯。

3.1.3浓盐酸（HCl）：12 mol/L。

3.1.4透析袋：可透过相对分子质量7 000以下的化合物，临用前用水浸泡1 h。

3.1.5微孔滤膜：0.45 μm，有机相型。

3.2试剂配制

3.2.1盐酸溶液（0.05 mol/L）：吸取4.17 mL浓盐酸，溶于水并稀释至1 000 mL。

3.2.2 0.1%磷酸溶液：吸取 1 mL磷酸，溶于水并稀释至1 000 mL。

3.2.3 0.1 %磷酸溶液-乙腈（4+6）：将0.1%磷酸溶液和乙腈按4：6的体积比混合均匀。

3.3标准品

  唾液酸（N-乙酰神经氨酸，C11H19NO9，CAS号131-48-6）：纯度≥96%，或经国家认证授予标准物质证书的标准品。

3.4标准溶液配制

3.4.1唾液酸标准储备液（1000mg/L）：准确称取适量唾液酸标准品（按纯度进行折算），用水溶解并配制成质量浓度为1 000 mg/L的标准储备溶液，于4℃下避光保存，保存期6个月。

3.4.2唾液酸标准系列工作液：分别吸取唾液酸标准储备液（1 000 mg/L）0.1 mL、0.5 mL、1.0 mL、5.0 mL、10.0 mL和20.0mL于100 mL容量瓶中，加入0.1%磷酸溶液-乙腈（4 +6）定容至刻度，混匀。唾液酸标准系列工作液的质量浓度分别为1.0 mg/L、5.0 mg/L、10.0 mg/L、50.0 mg/L、100.0 mg/L和200.0 mg/L，临用现配。

4仪器和设备

4.1液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。

4.2恒温水浴锅。

4.3涡旋混合器。

4.4分析天平：感量为0.1 mg和0.01 g。

4.5匀浆机：转速不低于 10 000 r/min。

4.6烘箱。

4.7高速离心机。

4.8筛网：筛网孔径 0.150 mm。

4.9研钵。

5分析步骤

5.1样品前处理

5.1.1试样制 备

5.1.1.1燕窝（盏、条、碎等）和固态燕窝制品

  称取10 g燕窝、固态燕窝制品在101℃~105℃烘箱中烘千至恒重（两次质量差不超过2 mg），在干燥器中冷却后研磨，全部过100 目筛（筛网孔径0.150 mm）后装入洁净容器，放于干燥器内，密闭备用。

5.1.1.2液态燕窝制品

  液态燕窝制品混匀后取200 g，先低速匀浆，再缓慢升至转速10 000 r/min，匀浆3 min，静置至泡沫消除，装入洁净容器，密闭避光，冷藏保存。

5.1.2 试样提取

5.1.2.1 燕窝（盏、条、碎等）和固态燕窝制品

  唾液酸总量的测定：称取0.1 g（精确至0.000 1 g）样品于25 mL具塞比色管中，加入10 mL盐酸溶液，盖上玻璃塞，涡旋混匀，置于80℃水浴中水解40 min，在水浴过程中每5 min振荡一次，取出离心管，冷却至室温。将水解液转移至100 mL容量瓶，用适量水洗涤离心管两次并转移至容量瓶中，用0.1%磷酸溶液-乙腈（4+6）定容至刻度，混匀。移取2 mL于离心管中，15000 r/min离心3 min，取上清液过0.45μm微孔滤膜后，待测。

  游离态唾液酸含量的测定：称取0.1 g（ 精确至0.000 1 g）样品于25 mL具塞比色管中，加入10 mL水，涡旋振荡3 min，将试样溶液转移至100 mL容量瓶中，用适量水洗涤离心管两次并转移至容量瓶中，用0.1%磷酸溶液-乙腈（4+6）定容至刻度，混匀。移取2 mL于离心管中，15000 r/min离心3 min，取.上清液过0.45 μm微孔滤膜后，待测。

5.1.2.2液态燕窝制品.

  结合态唾液酸含量的测定：称取10g（精确至0.01g）样品置于透析袋中（试样体积不超过透析袋容积的20%），扎紧透析袋两端，置于1 000 mL烧杯中在流动的自来水下透析24 h。透析后，将此透析袋中的试液转移至25 mL具塞比色管中，加少量水冲洗透析袋，合并至比色管中，加入104 μL浓盐酸，加水定容至25 mL，混匀，使水解液中盐酸的质量浓度为0.05 mol/L。盖上玻璃塞，置于80℃水浴中水解40 min，取出比色管，冷却至室温。将水解液转移至100 mL容量瓶中，用适量水洗涤比色管两次并转移至容量瓶中，用0.1%磷酸溶液-乙腈（4+6）定容至刻度，混匀。移取2 mL于离心管中，15 000 r/min离心3 min，取上清液过0.45 μm微孔滤膜后，待测。

5.2 液相色谱参考条件

液相色谱参考条件如下：

a）色谱柱：SAX强阴离子交换柱，250 mm×4.6 mm（内径），5μm，或相当者。

b）柱温：30℃。

c）检测波长：205 nm。

d）流动相：0.1 %磷酸溶液-乙腈（40+60，体积比）。

e）流速：1.0 mL/min。

f）进样量：10μL。

5.3标准曲线的制作

  将标准系列工作液分别注入液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以标准系列工作液中唾液酸的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。唾液酸标准溶液的色谱图参见附录A中图A.1。

5.4试样溶液的测定

  将试样溶液注入液相色谱仪中，得到峰面积，根据标准曲线得到待测液中唾液酸的质量浓度。标准工作液和待测样液中唾液酸的响应值均应在仪器线性响应范围内。如果含量超过标准曲线线性范围，需调整称样量或定容体积重新检测。

6分析结果的表述

试样中结合态唾液酸的含量按式（1）计算。

式中：

X——试样中唾液酸的含量， 单位为克每千克（g/kg）；

ρ——由标准曲线得到的试样溶液中唾液酸的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；

V——试样的定容体积，单位为毫升（mL）；

m——试样的取样量，单位为克（g）；

1000——换算系数。

计算结果需扣除空白值，保留3位有效数字。

对于燕窝和固态燕窝制品，分别测定唾液酸总量和游离态唾液酸含量，结合态唾液酸含量由唾液酸总量减去游离态唾液酸含量计算得到。

7精密度

  在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

8其他

  燕窝和固态燕窝制品，当称样量为0.1 g时，检出限为0.3 g/kg，定量限为1.0 g/kg；液态燕窝制品，当称样量为10 g时，检出限为0.003 g/kg，定量限为0.01 g/kg。