转化生长因子α(transforming growth factor-α,TGF-α)的结构和功能与TGF相似,属EGF家族。检测EGF生物学活性的方法也可以检测TGF-α的活性。此外,EGF能诱导3T3小鼠的J2细胞合成DNA,TGF-α与EGF竞争受体,抑制EGF的作用,故可通过抑制EGF诱导的DNA合成试验检测TGF-α的活性。
1.将3T3J2细胞培养在含0.5%FCS的DMEM培养液中,用0.25%胰蛋白酶消化细胞,用细胞培养液洗涤细胞2次,并配成6×104/mL。
2.于24孔培养板每孔加入0.5mL细胞悬液,用细胞培养液作系列稀释的TGF-a待测样品或标准晶0.5mL、1nmol/LEGF和luCi(37kBp)3H-TdR,并设置单加EGF的阳性对照和高剂量TGF-a阴性对照,均设3复孔,总反应体积为lmL。
3.置37~C 5%C02温箱中培养72h。用PBS洗3次,每孔加入5%三氯醋酸lmL沉淀DNA,再用甲醇洗孔1次,离心去甲醇溶液。加入lmLlmol/LNaOH,溶解细胞。将各孔细胞吸人闪烁液瓶中,在p-计数仪上测定各孔的cpm。根据标准曲线计算待测样品中的TGF-a含量(活性)。
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