Q1:坐标轴的意义?
1、 单参数直方图
每一个细胞单参数的测量数据可以整理成统计分布,以直方图的方式来显示。在图中,横坐标表示荧光信号或散射光信号相对强度的值,其单位是道数(channel),可以是线形(line)或者对数(log)。纵坐标一般是相对细胞/粒子数(count)!
2、 二维图
在二维图的中,横坐标/纵坐标都表示荧光信号或散射光信号相对强度的值,可以是线形(line)或者对数(log)。双参数图可以将样品细胞群分开,从而方便对感兴趣的细胞进行分析。
Q2:“Gate”和 “Regin”?
设门是流式细胞分析中一种重要的技术,只有通过佳的设门方式,才能准确地获取和分析数据,从而得到临床诊断和科研中有价值的信息。
On-line gating(threshold gating)监测/获取数据
Off-line gating: 分析实验数据 散射光设门/荧光设门 散射光/荧光联合设门
多重逻辑门(组合门)多重逻辑门 G3=R1 and R2 (G3=R1×R2)
其它: G=R1 or R2 G=R1 not R2Q3:流式图中的颜色与荧光颜色?
流式图中的颜色为区分不同细胞群而人为, 与荧光颜色无关!!
Q4:流式图中的阴/阳(N/P)如何划分?
如何做M1阴性界限?实际上,这个M1的划分*是根据阴性(同型)对照来的!如下图:左图为同型对照,即:您所检测的物质在阴性组中的基础表达量,可以理解为背景、静息状态下、基础水平、未受刺激时等。右图即阳性组,也就是接受刺激后,功能状态下、药物作用后等。
Q5: 这么巧,阴性正好在101划分??
其实, 我们可以人为地将电压,放大倍数调到相应的大小,使阴性的右边界在某一个值上,(通常划在101附近)这样后期做sample时好看!当然也可以调到102,103次方。
Q6:为什么要进行荧光补偿?
流式细胞分析中经常要用到2种以上的荧光标记抗体进行染色,而目前所使用的多种荧光染料发射谱间有一定重叠。
“荧光补偿”这个术语是指修正荧光渗漏的过程,如从探测器除去除匹配荧光以外的任何荧光信号。
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