手机版
化工仪器网手机版
化工仪器网小程序
官方微信
公众号：chem17
扫码关注视频号
| 实验方法原理 | 荧光素 4-单氧酶（ATP-水解）提取于萤火虫，Photinus Pyralis。
荧光素＋ATP＋O2→氧和虫荧光素＋PPi＋H2O＋光
光密度 I 是和 Michaelis-Menten 等式相关的
式中，H 是 Planck 常量；v 是发射光的频率。当 ATP 浓度非常低（［ATP］＜＜Km）时，Michaelis-Menten 等式就可以简化成：
I＝常量 ×［ATP］
常量＝Ｖ/Km。光密度与 [ATP] 成正比。 |
|---|---|
| 实验材料 | 荧光素酶 |
| 试剂、试剂盒 | Tris-乙酸 ATP MgSO4 荧光素 |
| 仪器、耗材 | 分光光度计 |
| 实验步骤 | 实验所需「试剂」具体见「其他」
开始加入 0.01 ml ATP
10 s 后（25℃）读光密度值（562 nm 处的放射大值）。利用在 0.05～0.5 umol/L 之间的 ATP 制作标准曲线。
一个酶单位被定义为，在 25℃ 甘氨酸-Tris pH 7.6 溶液中，含 5 pmol ATP 及 7.5 nmol荧光素的 50 ul 实验混合物所测量到的光输出。一个光输出单位产生一个生物计高峰相当于在 PPO/POPOP 鸡尾酒中 14C 的 0.02 uCi（1991 年以前，1 个单位是指 pH 7.7、25℃ 时，存在 0.6 mmol/L ATP 和 0.1 mmol/L D-荧光素的条件下，每分钟能产生 1 nmol 焦磷酸的荧光素的量）。 |
| 注意事项 |
|
| 其他 | 试剂
0.1 mol/L Tris-乙酸，pH 7.75
10 mol/L ATP（二钠盐，三水合物，Mr＝605.2；准备 10 mmol/L 60.5 mg 溶于 10 ml 溶液并且稀释 10 ul 于 10 ml 水中）
0.1 mol/L MgSO4（MgSO4·7H2O，Mr＝246.5；246 mg 溶于 10 ml 水中）
1 mol/L 荧光素（4，5-二氢-［6-羟基-2-苯噻唑］-4-噻唑酸，Mr＝280.3；钠盐，Mr＝302.3；3 mg 溶于10 ml 0.1 mol/L Tris-乙酸 pH 7.75， 储存于 -20℃）。
荧光素酶（提取于萤火虫，1 ug/ml溶于 0.1 mol/L Tris-乙酸，pH 7.75） |
免责声明
- 凡本网注明“来源：化工仪器网”的所有作品，均为浙江兴旺宝明通网络有限公司-化工仪器网合法拥有版权或有权使用的作品，未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。已经本网授权使用作品的，应在授权范围内使用，并注明“来源：化工仪器网”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
- 本网转载并注明自其他来源（非化工仪器网）的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点和对其真实性负责，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品第一来源，并自负版权等法律责任。
- 如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起一周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。
采购中心
