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核酸探针杂交技术检测猪繁殖与呼吸综合征

来源:上海源叶生物科技有限公司   2011年04月06日 10:23  

核酸探针杂交技术。Sur等(1996)以PRRSV的RNA为模板,通过RT-PCR扩增ORF7中的433bp片段,应用地高辛标记方法制备PRRSV特异性cDNA探针,建立了检测PRRSVRNA的原位杂交技术。

该方法可以在肺、淋巴组织、肺泡巨噬细胞(尸体剖检后灌洗获得)、淋巴集结、肾脏的感染细胞内检测到PRRSVRNA,较免疫组化具有更高的敏感性和特异性,特别是检测感染后期细胞内的PRRSV RNA。应用生物素标记方法制备互补于ORFlb(LV株)和ORF7(VR 2385株)的两种寡核苷酸探针,建立了检测福尔马林固定肺和淋巴组织中PRRSVRNA的原位杂交技术(Park,et a1,1996),该技术有很好的敏感性,但操作比较烦琐,在诊断上也较少应用。
 

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