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抑菌环试验

来源:上海希言科学仪器有限公司   2018年03月27日 10:16  

1 目  的 

测定抗(抑)菌产品对细菌和真菌的抗(抑)菌作用。 

2 原  理 
利用抑菌剂不断溶解经琼脂扩散形成不同浓度梯度,以显示其抑菌作用。试验通过抑菌环大小以判断其是否具有抑菌能力。本试验适用于抑菌剂与溶出性抗(抑)菌产品的抗(抑)菌效果鉴定。  

3 实验材料及器材 

(1)实验菌株  金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)、大肠杆菌(8099 或ATCC 11229)、白色念珠菌(ATCC 10231)菌悬液及根据抑菌剂特定用途所用的其他菌悬液

(2)抑菌剂载体  5mm 直径圆形新华一号定性滤纸片,经压力蒸汽灭菌处理后,置 120℃ 烤干2h,保存备用 

(3)活菌培养计数所需器材      

(4)微量移液器  5μL~50μL,可调式

(5)游标卡尺 

(6)营养琼脂培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基与沙堡琼脂培养基 

4 操作程序 

(1)抑菌片的制备:对液体抑菌剂,取无菌并干燥的滤纸片。每片滴加实际使用浓度抑菌剂溶液 5μL,然后将滤纸片平放于清洁的无菌平皿内,开盖置恒温培养箱(37℃)中烤干,或置室温下自然干燥后备用。 溶出性抗(抑)菌产品,可直接制成直径为 5mm,厚不超过 4mm 圆片(块),每 4 片(块) 一组。 

(2)阴性对照样片的制备:取无菌干燥滤纸片,每片滴加无菌蒸馏水5μL,干燥后备用。     溶出性抗(抑)菌产品的阴性对照样本, 应取同种材质不含抑菌成份的样品,制成与试验组大小相同的样片(块)。 

(3)试验菌的接种:用无菌棉拭子蘸取浓度为 5×105cfu/mL~5×106cfu/mL 试验菌悬液,在适宜的培养基平板表面均匀涂抹3次。每涂抹1次,平板应转动 60°,zui后将棉拭子绕平板边缘涂抹一周。盖好平皿,置室温干燥 5min。 

(4)抑菌剂样片贴放:每次试验贴放1个染菌平板,每个平板贴放4片试验样片, 1 片阴性对照样片,共 5 片。用无菌镊子取样片贴放于平板表面。各样片中心之间相距 25mm 以上, 与平板的周缘相距 15mm 以上。贴放好后,用无菌镊子轻压样片,使其紧贴于平板表面。盖好平皿,置 37℃恒温培养箱,培养 16h~18h 观察结果。用游标卡尺测量抑菌环的直径(包括贴片)并记录。 

(5)试验重复3次。 

(6)测量抑菌环时,应选均匀而*无菌生长的抑菌环进行。测量其直径应以抑菌环外沿为界。 4

5 评价规定 

(1)抑菌作用的判断: 
    抑菌环直径大于 7mm 者,判为有抑菌作用。     抑菌环直径小于或等于 7mm 者,判为无抑菌作用。 

(2)3 次重复试验(共12个样片)均有抑菌作用结果者,判为合格。    

(3)阴性对照组应无抑菌环产生。否则试验无效。

6 注意事项 
(1)每次试验均应设置阴性对照。在报告中亦必须将对照组的结果列出。 
(2)接种用细菌悬液的浓度应符合要求。浓度过低,接种菌量少,抑菌环常因之增大;浓度过高,接种量过多,抑菌环则可减小。 
(3)应保持琼脂浓度的准确性,否则可影响抑菌环的大小。 
(4)培养时间不得超过 18h。培养过久,部分细菌可恢复生长,抑菌环变小。 
(5)抑菌环直径可受抑菌剂的量、抑菌性能和干湿度影响。故抑菌剂滤纸片应在试验当天制备。

 

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